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【求助】HPLC保留时间的重复性问题

  • zhuwenshuasd
    2007/10/29
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 本人正在做一个药品的HPLC分析,用的是同一根色谱柱同一仪器,不同日期分析样品的时候主峰的保留时间却不能重复,有时候相差几分钟,有时候相差一分钟,请各位帮我分析一下为什么主峰的保留时间不能重复,同时保留时间的相对标准偏差在什么范围内是可以接受的?

    色谱条件如下:
    -色谱柱为C18, 长0.15m,内径4.6mm
    -流动相流速为1.5mL/min,以四氢呋喃-乙腈-高氯酸纳溶液(1:20:80)为流动相。高氯酸钠溶液的制备:将5.0ml高氯酸用900mL的水稀释,用稀释的氢氧化钠溶液调节PH值为3.5,然后用水稀释到1000mL。
    -检测波长为254nm。
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  • shalin

    第1楼2007/10/29

    流动相比例不可能完全每次一样,柱温也有差别。液相要保持保留时间完全一致的可能性较小。只要分析没有问题,也没必要追求保留时间完全一致啊。

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  • yjxia

    第2楼2007/10/29

    你的峰大概什么时候出的?如果15min以前出的话,就不太好了。同一天测样又出现这样情况吗?

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  • 晕乎乎

    第3楼2007/10/29

    流动相有机溶剂的挥发会影响保留时间的,配制时都有误差的。反正每次都有标样对照的。

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  • lenovο

    第4楼2007/10/29

    出峰的允许时间宽度(即保留时间偏差)与其标准保留时间成正比,一般工作站上都是可以设定的,好像并没有统一标准。另外,影响峰保留时间的因素比较多,譬如对于没有柱温箱的系统环境温度变化会影响保留时间偏差。

    zhuwenshuasd 发表:本人正在做一个药品的HPLC分析,用的是同一根色谱柱同一仪器,不同日期分析样品的时候主峰的保留时间却不能重复,有时候相差几分钟,有时候相差一分钟,请各位帮我分析一下为什么主峰的保留时间不能重复,同时保留时间的相对标准偏差在什么范围内是可以接受的?

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  • 锐飏

    第5楼2007/10/29

    温度,一定要注意温度,温度的影响很大。

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  • zhuwenshuasd

    第6楼2007/10/29

    此方法是欧洲药典的方法,本身对柱温没有什么要求,我想柱温应该不会有太大的影响。

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  • zhuwenshuasd

    第7楼2007/10/29

    此方法是欧洲药典的方法,本身对柱温没有什么要求,我想柱温应该不会有太大的影响。

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  • biotrandglobal

    第8楼2007/10/29

    保留时间至少要在3%之内(同一浓度的同一样品),最好能在1%内.
    同一样品的不同浓度最好不要超过5%.

    zhuwenshuasd 发表:本人正在做一个药品的HPLC分析,用的是同一根色谱柱同一仪器,不同日期分析样品的时候主峰的保留时间却不能重复,有时候相差几分钟,有时候相差一分钟,请各位帮我分析一下为什么主峰的保留时间不能重复,同时保留时间的相对标准偏差在什么范围内是可以接受的?

    色谱条件如下:
    -色谱柱为C18, 长0.15m,内径4.6mm
    -流动相流速为1.5mL/min,以四氢呋喃-乙腈-高氯酸纳溶液(1:20:80)为流动相。高氯酸钠溶液的制备:将5.0ml高氯酸用900mL的水稀释,用稀释的氢氧化钠溶液调节PH值为3.5,然后用水稀释到1000mL。
    -检测波长为254nm。

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  • 鬼斧神编

    第9楼2007/10/29

    不同日期进样,其他条件相同貌似也没有可比性吧
    测重复性建议同天,同仪器,同一个人进行

    zhuwenshuasd 发表:本人正在做一个药品的HPLC分析,用的是同一根色谱柱同一仪器,不同日期分析样品的时候主峰的保留时间却不能重复,有时候相差几分钟,有时候相差一分钟,请各位帮我分析一下为什么主峰的保留时间不能重复,同时保留时间的相对标准偏差在什么范围内是可以接受的?

    色谱条件如下:
    -色谱柱为C18, 长0.15m,内径4.6mm
    -流动相流速为1.5mL/min,以四氢呋喃-乙腈-高氯酸纳溶液(1:20:80)为流动相。高氯酸钠溶液的制备:将5.0ml高氯酸用900mL的水稀释,用稀释的氢氧化钠溶液调节PH值为3.5,然后用水稀释到1000mL。
    -检测波长为254nm。

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  • 我想当元帅

    第10楼2007/10/30

    完全同意楼上的说法,即使所有条件都相同,但是是两天做的,重复性很难保持一致.我就做过一次实验,乙腈:水(50:50)配的时候可能就差一点点,实验结束发现保留时间差了一分钟.

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