【求助】有關HPLC幾個問題?

天然VE和植物甾醇的液相色谱分析
冯婷，刘华
（北分瑞利集团公司色谱仪器中心，北京，100095）
摘要：介绍了极具生物活性的天然VE和植物甾醇的高效液相色谱分析方法。该方法使用SY-8000系列仪器，搭建等度或二元低压系统对样品组分进行分离和检测，取得较好结果。
关键词：天然VE 植物甾醇 HPLC
天然VE和甾醇是人类营养的必要成分，对人体具有重要的生理活性作用，是治疗和辅助治疗一系列疾病的有效药物，在抗不育、抗癌、抗衰老、治疗冠心病、心肌梗塞、动脉硬化和血栓、溃疡及厚皮病等方面都具有重要的作用。
从植物油中直接提取而得的天然VE称生育酚混缩液（tocopherols concentrate, mixed），是α、β、γ和δ型生育酚的混合液，其中以α-生育酚的生物活性最强。若将α-生育酚生物活性记为1，则β-生育酚为0.5，γ-生育酚为0.1，δ-生育酚为0.03。而抗氧化性则是δ-生育酚最强，由强到弱顺序为δ-生育酚＞γ-生育酚＞β-生育酚＞α-生育酚。目前在植物体中发现了40种较为主要的甾醇，其中谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇含量较高，最突出的是豆甾醇具有较强的抗炎和消炎作用而直接用作为抗炎药物。采用高效液相色谱可将天然VE和植物甾醇这两种混合物进行良好的分离，便于进一步的研究及产品组分的检测。
1. 天然维生素E
1.1 仪器与试剂
SY-8100高压输液泵，SY-8200紫外分光检测器（北分瑞利色谱中心）；K-5004在线脱气机，K-1500溶剂组织器，手动进样阀（6位3通）（BFRL-KNAUER）；SY-8000色谱反控软件；色谱纯甲醇（天津化学试剂二厂），双蒸水。
1.2 色谱条件
参照国标GB/T 5009.82-2003《食品中维生素A和维生素E的测定》确定分析方法：
色谱柱：Kromasil C18 5μ，250mm*4.6mm
流动相：甲醇:水=98:2（V/V）
流速：1.7mL/min
检测波长：λ=300nm
样品浓度：1.0mg/mL，溶剂为甲醇
进样量：20μL
1.3 结果与讨论
样品在该分析条件下得到良好的分离，高压输液泵搭建低压体系，提供稳定流量为组分的分离奠定基础；手动六通进样阀可同时进样并采集谱图，避免了保留时间的误差；反控软件直接进行各项参数的设定，操作简便。分析结果见图1。
图1 天然VE色谱图
2. 植物甾醇
2.1 仪器与试剂
SY-8100高压输液泵，SY-8200紫外分光检测器（北分瑞利色谱中心）；K-5004在线脱气机，手动进样阀（6位3通）（BFRL-KNAUER）；SY-8000色谱反控软件；色谱纯甲醇（天津化学试剂二厂）。
2.2 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18 5μ，250mm*4.6mm
流动相：纯甲醇
流速：0.8mL/min
检测波长：λ=210nm
样品浓度：0.1mg/mL
进样量：20μL
2.3 结果与讨论
样品在等度条件下即可得到良好的分离，菜油甾醇和谷甾醇间分离度为1.0，解决了气相色谱分析中二者分离难的问题；高压输液泵可升级为制备型，进一步优化条件后即可进行四种甾醇的制备。分析结果见图2。

图2 植物甾醇色谱图

参考文献：
[1] 于世林. 高效液相色谱方法及应用（第四版）. 北京：化学工业出版社，2004.4
[2] GB/T 5009.82-2003《食品中维生素A和维生素E的测定》
[3] 许文林. 混合植物甾醇中豆甾醇和β-谷甾醇的高效液相色谱分析. 分析测试学报，2003，22（6）：98～101

Analysis of Vitamin E and Phytosterol by HPLC
Feng Ting, Liu Hua
(BAIF Chromatograph Instrument Center)
Abstract: To analyze the chemical components of Vitamin E and Phytosterol, HPLC was used in this study. The results show that SY-8000 has good performance.
Key words: Vitamin E Phytosterol HPLC