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【转帖】中人民共和国家标准食品中叔丁基羟基茴香醚（BHA）与2,6—二叔丁基对甲酚（BHT）的测定方法

happy水中月

2008/02/18

薄层色谱（TLC）

中华人民共和国国家标准

GB/T 5009.30—1996

食品中叔丁基羟基茴香醚（BHA）与代替GB 5009.30—85

2,6—二叔丁基对甲酚（BHT）的测定方法

第二篇薄层色谱法

8 原理

用甲醇提取油脂或食品中脂肪的抗氧化剂，用薄层色谱定性，根据其在薄层

板上显色后的最低检出量，与标准品最低检出量比较而概略定量，对高脂肪食

品中的BHT、BHA、PG能定性检出。

9 试剂

以下试剂均为分析纯。

9.1 甲醇。

9.2 石油醚（30～60℃）。

9.3 异辛烷。

9.4 丙酮。

9.5 冰乙酸。

9.6 正己烷。

9.7 二氧六环。

9.8 硅胶G：（薄层用）。

9.9 聚酰胺粉200目。

9.10 可溶性淀粉。

9.11 BHT、BHA、PG混合标准溶液的配制：分别准确称取BHT、BHA、PG各

10.0 mg，分别用丙酮溶解转入三个 10 mL 容量瓶中，用丙酮稀释至刻度。每

毫升含 1.0 mg BHT、BHA、PG，吸取BHT（1.0 mg/mL）1.0 mL、BHA（1.0 mg/mL）、

PG（1.0 mg/mL）各 0.3 mL 置同一 5 mL 容量瓶中，用丙酮稀释至刻度。此溶液每

毫升含 0.20 mg BHT、0.060 mg BHA、0.060 mg PG。

9.12 显色剂:2，6—二氯醌—氯亚胺的乙醇溶液（2 g/L）。

10 仪器

10.1 减压蒸馏装置。

10.2 浓缩瓶具刻度的尾管。

10.3 层析槽

a. 24cm×6cm×4cm，

b. 20cm×13cm×8cm。

10.4 玻璃板：5cm×20cm、10cm×20cm。

10.5 微量注射器：10μL。

11 分析步骤

11.1 提取

11.1.1 植物油（花生油、豆油、菜籽油、芝麻油）：称取 5.00 g 油置 10 mL 具塞

离心管中，加入 5 mL甲醇，密塞振摇 5 min，放置 2 min，离心（3000～3500r/min）

5min，吸取上层清液置 25 mL 容量瓶中，如此重复提取共五次，合并每次甲醇提

取液，用甲醇稀释至刻度。吸取 5 mL 甲醇提取液置一浓缩瓶中，于40℃水浴上

减压浓缩至 0.5 mL，留作薄层色谱用。

11.1.2 猪油：称取 5.00 g 猪油置 50 mL 具磨口的锥形瓶中，加入 25 mL 甲醇，装

上冷凝管于75℃水浴上放置 5 min，待猪油完全溶化后将锥形瓶连同冷凝管一起

自水浴中取出，振摇 30 s，再放入水浴 30 s；如此振摇三次后放入75℃水浴，

使甲醇层与油层分清后，将锥形瓶连同冷凝管一起置冰水浴中冷却，猪油凝固，

甲醇提取液通过滤纸滤入 50 mL 容量瓶中，再自冷凝管顶端加入 25 mL 甲醇，

重复振摇提取一次，合并二次甲醇提取液，将该容量瓶置暗处放置，待升至室

温后。用甲醇稀释至刻度。吸取 10 mL 甲醇提取液置一浓缩瓶中，于40℃水浴上

减压浓缩至 0.5 mL,留作薄层色谱用。

11.1.3 食品（油炸花生米、．酥糖、巧克力、饼干）：按6.2测定脂肪的含量，

并称取约 2.00 g 的脂肪视提取出的油脂是植物油还是动物性脂肪而决定提取方

法。可按11.1.1或11.1.2操作。

11.2 测定

11.2.1 薄层板的制备

11.2.1.1 硅胶G薄层板：称取 4 g 硅胶G置玻璃乳钵中，加 10 mL 水。研磨至粘稠

状，铺成 5cm×20cm 的薄层板三块，置空气中干燥后于80℃烘1h，存放于干燥

器中。

11.2.1.2 聚酰胺板：称取 2.4 g 聚酰胺粉 0.6 g 可溶性淀粉置于玻璃乳钵中，加约

15 mL水，研磨至浆状铺成 10cm×20cm 的薄层板三块，置空气中干燥后于80℃

烘 1 h，置干燥器中保存。

11.2.2 点样

11.2.2.1 用 10 μL 微量注射器在 5cm×20cm 的硅胶G薄层板上距下端 2.5 cm 处

点三点：标准溶液 5 μL、样品提取液 6～30 μL、标准溶液 5μL。

11.2.2.2 另取一块硅胶G薄层板点三点：标准溶液 5μL、样品提取液 1.5～3.6 μL、

加标准溶液 5 μL。

11.2.2.3 用 10 μL微量注射器在 10cm×20cm 的聚酰胺薄层板上距下端 2.5 cm 处

点：标准溶液 5μL，样品提取液 10μL，加标准溶液 5 μL，边点样边用吹风机

吹干，点上一滴吹干后再继续滴加。

11.2.3 展开

11.2.3.1 溶剂系统

硅胶G薄层板：正己烷—二氧六环—醋酸（42＋6＋3），异辛烷—丙酮—醋

酸（70＋5＋12）聚酰胺板：

a.甲醇—丙酮—水（30＋10＋10）

b.甲醇—丙酮—水（30＋10＋12.5）

c.甲醇—丙酮—水（30＋10＋15）

对甲醇—丙酮—水系统，芝麻油只能用（a）、菜籽油用（b），食品用（c）。

展开系统中水的比例对花生油、豆油、猪油中PG的分离无影响。

将点好样的薄层板置预先经溶剂饱和的展开槽内展开 16 cm。

11.2.3.2 展开

11.2.3.2.1 硅胶G板自层析槽中取出薄层板置通风橱中挥干至PG标准点显示灰黑

色斑点。即可认为溶剂己基本挥干，喷显色剂，置110℃烘箱中加热 10 min，比

较色斑颜色及深浅，趁热将板置氨蒸气槽中放置 30s，观察各色斑颜色变化。

11.2.3.2.2 聚酰胺板自层析槽中取出薄层板置通风橱中吹干，喷显色剂，再通

风挥干，直至PG斑点清晰。

11.2.4 评定

11.2.4.1 定性

根据样品中显示出的BHT、BHA、PG点与标准BHT、BHA、PG点比较Rf值和显色

后斑点的颜色反应定性。如果样液点显示检出某种抗氧化剂，则样品中抗氧化剂

的斑点必须与加入内标的抗氧化剂斑点重叠。

　　当点大量样液时由于杂质多，使样品中抗氧化剂点的Rf值略低于标准点。这

时必须在样品点上滴加标准溶液作内标，比较Rf值。

表1 BHT、BHA、PG在薄层板上的最低检出量Rf值及斑点颜色

---------------------------------┬----------------------------------------┬-----------------------------------------------┐

薄层板 │ 　硅　胶　G　板　 │ 　聚　酰　胺　板 │

结果 ├----------------------------------------------------┼------------------------------------------------┤

│ Rf值最低检出量色斑颜色 │ Rf值最低检出量色斑颜色 │

抗氧化剂 │ μg │ μg │

---------------------------------┼--------------------------------------┼------------------------------------------------┤

BHT │ 0.73 1 桔红→紫红 │ — — — │

BHA │ 0.37 0.3 紫红→蓝紫 │ 0.52 0.3 灰棕 │

PG │ 0.04 0.3 灰→黄棕 │ 0.66 0.3 蓝 │

--------------------┴--------------------------------------------------┴------------------------------------------------┘

注：PG在硅胶G板上定性及半定量不可靠，有干扰且Rf值太小，须进一步用聚

酰胺板展开。

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happy水中月

第1楼2008/02/18

11.2.4.2 概略定量及限度试验

根据薄层板上样液点抗氧化剂所显示的色斑深浅与标准抗氧化剂色斑比较而估

计含量，如果在11.2.2.1条下的硅胶G薄层板上，样品中各抗氧化剂所显色斑浅于

标准抗氧化剂色斑，则样品中各抗氧化剂含量在本方法的定性检出限量以下

（BHA、PG点样量为 6μL,BHT点样量为 30μL)。如果在11.2.2.2条下的硅胶G薄

层板上，样品中各抗氧化剂所显色斑的颜色浅于标准抗氧化剂色斑，则样品中

各抗氧化剂的含量没有超过使用卫生标准（BHA、PG点样量为 1.5 μL,BHT点样

量为 3.6 μL）。如果样品点色斑颜色较标准点深，可稀释后重新点样，估计含量。

11.3 计算

m3×1000

　　　　　X2=------------------------------------------------------ …………………… (3)

V4

m4×-------×D×1000×1000

V3

式中：X2—样品中抗氧化剂（BHA、BHT、PG）以脂肪计的含量，g/kg；

　　　m4—薄层板上测得样品点抗氧化剂的量，μg；

　　　V3—供薄层层析用点样液定容后的体积，mL；

　　　V4—滴加样液的体积，mL；

　　　D —样液的稀释倍数;

　　　m3—定容后的薄层层析用样液相当于样品的脂肪质量，g。

表2 所示样品中各抗氧化剂定性检出限度（mg/kg)

---------------------------------┬--------------------------------------------

抗氧化剂 │ BHT BHA PG

│

样品 │ 检出浓度mg/kg

--------------------------------┼-------------------------------------------

油炸花生米　 │ 25 10 10

酥　糖　 │ 　10 10 10

饼　干　 │ 10 10 10

巧　克　力　 │ 25 25 25

油　脂 │ 25 25 25

--------------------┴--------------------------------------------------

0

阿du

第2楼2008/03/02

月亮，这个标准里只有薄层法么？怎么不全啊？

0

happy水中月

第3楼2008/03/02

其它方法发到其它版面了
duliuhui 发表:月亮，这个标准里只有薄层法么？怎么不全啊？

0

小懒猪

第4楼2008/03/31

“11.3 计算”的那个公式是怎么样的啊?
看不懂

0

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