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【原创】对于梯度洗脱的一点总结

speleers

2008/05/04

液相色谱（LC）

梯度洗脱

对于组分复杂的样品，采用一种色谱体系，很难得到理想的分离结果。要么分离时间太长，要么分离度太差。

液相色谱中采用梯度洗脱,目的：缩短的时间；提高分离效果。
梯度洗脱：流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k'，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。

梯度洗脱特点：
提高柱效
改善检测器的灵敏度
当样品中的一个峰的k'值和最后一个峰的k'值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。
梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。
梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。

梯度范围：指流动相中强溶剂分别在起始液和终止液中的浓度。
调节梯度范围对得到最佳的梯度分离起重要作用。
最佳梯度范围：第一个峰处分时间大约为2倍的t0，梯度结束时把最后一个峰洗脱出来。

梯度洗脱的形式
线形梯度：在梯度洗脱时，流动相强度的变化梯度时间成线性比例。在一定时间内流动相强度越大，直线斜率越大。
指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度岁梯度时间变化称指数关系。
凹形：梯度起始阶段强度变化缓慢，随时间增加强度变化加快。
凸形：起始阶段梯度速度变化快，终止阶段梯度速度变化慢。
折线形：
选择适当的A,B溶剂
强度：A溶剂为低强度；
　　　B溶剂为高强度，B溶剂的强度应能够在梯度过程中使所有欲测谱带都能被洗脱，并使各谱带的k’值在2-10之间。

初步分离

　　选择好A、B两种溶剂，先按中等强度进行配比，在此恒定强度下进行初步分离。A、B混合溶剂强度应使所有谱带的k’值在1-10之间。

梯度形式选择
经过初步分离，一般可能得到3种分离色谱图：
① 前半部峰重叠，后半部峰分离度过大，保留时间太长；
　可选择线形梯度，或凹形梯度。
② 前半部分离良好，后半部峰重叠；
　可选择凸形梯度。
③ 前后两部分分离良好，中间部分峰重叠。
　可选择折线梯度。

精
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xuyan1984

第1楼2008/05/05

恩，不错，继续努力！！！

0

sailjw2008

第2楼2008/05/08

我用的型号不一样，好像有点区别哦！

0

cuddly-koala

第3楼2008/05/08

这种梯度洗脱，是不是因为不同的物质在不同的流动相中的保留时间不一样，在设置了梯度洗脱之后，跑出来的峰的时间就可以达到较短，分离效果明显呢？

0

cxh1943

第4楼2008/05/08

很好很强大
深有感触

0

lynnc

第5楼2008/05/08

刚接触这方面的知识,值得学习!

0

32288922

第6楼2008/05/10

谢谢分享
支持

0

luckiss

第7楼2008/05/10

好经验，学习中

0

steven_sela

第8楼2008/05/11

谢谢楼主，是不是基本适用所有液相啊？

0

ximeng2007

第9楼2008/05/11

只要液相色谱仪配有梯度洗脱装置都可以进行梯度洗脱，梯度洗脱的原理是一样的，即通过改变流动相中各溶剂组成的比例来改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子，并使样品中的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。
对一未知样品进行分析分离时，首先要进行摸索以确定适合用等度洗脱还是梯度洗脱；对于复杂的分析样品采用梯度洗脱能够缩短分离时间，实现很好的分离。

0

pharm2002bcc

第10楼2008/05/11

感谢分享！
speleers 发表:梯度洗脱

对于组分复杂的样品，采用一种色谱体系，很难得到理想的分离结果。要么分离时间太长，要么分离度太差。

液相色谱中采用梯度洗脱,目的：缩短的时间；提高分离效果。
梯度洗脱：流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k'，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。

梯度洗脱特点：
提高柱效
改善检测器的灵敏度
当样品中的一个峰的k'值和最后一个峰的k'值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。
梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。
梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。

梯度范围：指流动相中强溶剂分别在起始液和终止液中的浓度。
调节梯度范围对得到最佳的梯度分离起重要作用。
最佳梯度范围：第一个峰处分时间大约为2倍的t0，梯度结束时把最后一个峰洗脱出来。

梯度洗脱的形式
线形梯度：在梯度洗脱时，流动相强度的变化梯度时间成线性比例。在一定时间内流动相强度越大，直线斜率越大。
指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度岁梯度时间变化称指数关系。
凹形：梯度起始阶段强度变化缓慢，随时间增加强度变化加快。
凸形：起始阶段梯度速度变化快，终止阶段梯度速度变化慢。
折线形：
选择适当的A,B溶剂
强度：A溶剂为低强度；
　　　B溶剂为高强度，B溶剂的强度应能够在梯度过程中使所有欲测谱带都能被洗脱，并使各谱带的k’值在2-10之间。

初步分离

　　选择好A、B两种溶剂，先按中等强度进行配比，在此恒定强度下进行初步分离。A、B混合溶剂强度应使所有谱带的k’值在1-10之间。

梯度形式选择
经过初步分离，一般可能得到3种分离色谱图：
① 前半部峰重叠，后半部峰分离度过大，保留时间太长；
　可选择线形梯度，或凹形梯度。
② 前半部分离良好，后半部峰重叠；
　可选择凸形梯度。
③ 前后两部分分离良好，中间部分峰重叠。
　可选择折线梯度。

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