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【原创】【恐龙转载】 Kromasil 100－5 C18柱出什么问题了？

恐龙

2008/05/08

液相色谱（LC）

本人转载：来自http://www.sepublog.com/blog/?uid-3-action-viewspace-itemid-467：

此贴原来发在中国色谱网上，时间大概在2004-2005年，是《实用色谱技术问答》一书的一个问答，此书将在今年与广大读者见面，由化工出版社出版，作者为刘虎威、张维冰、施超欧（恐龙，konglong）、仲岳桐(胖丁丁）。本人负责HPLC部分的编写。

为了大家认识真正的原创作者，特在这里重新发一下，原文略作修改，如有异议，到时大家去看书。

3.1.2 问：Kromasil 100－5 C18柱出什么问题了？
问：有网友提到新买了一根Kromasil 100－5 C18柱，刚开始用时效果较好，条件为30 mM KH2PO4，pH=2.0，柱温30C。连续使用两天后，各标准品峰明显前移。有些原来能分开的峰现在分不开了。最近我继续使用该柱，不同的是每天连续使用时间不超过12小时。使用后先用5%甲醇/水冲洗，再用100%甲醇冲洗。这样使用了三天，峰的保留时间不再前移。因此，我有二个问题：
（1）峰的前移是由于C18被水解的缘故吗？如不是，又是什么原因呢？
（2）对于使用低pH纯水系缓冲盐的C18柱，每天使用12小时，用5%甲醇/水洗净缓冲盐，再用甲醇冲洗，能延长C18柱的使用寿命吗？

答：（酸菜、jayee、恐龙、fanny、半透膜、杨光、sunear等参与）使用Kromasil 100－5 C18出现这种情况是不了解这种柱子的特性。关于上面的二个问题，作如下分析：
（1）峰前移的原因是使用了纯水流动相的缘故。kromasil填料以高碳覆盖量而自豪，在纯水（或水比例大于95%）的环境下因为C18官能团非极性排斥，会使伸展状态的官能团在排斥力的作用下“倒伏”，同时也因极性力形成的张力使“水膜”在填料微孔口形成而覆盖微孔口，这两点都使分析物难以与C18官能团接触，保留时间因此提前。极端情况下，甚至丧失保留性质。不仅是C18，对于Kromasil的其他填料，都不推荐用纯水（或水比例大于95%）的流动相。
（2）其后提到“最近我继续使用该柱，不同的是每天连续使用时间不超过12小时。使用后先用5%甲醇/水冲洗，再用100%甲醇冲洗。这样使用了三天，峰的保留时间不再前移”。这正是采用了正确的方法。用甲醇或乙腈等纯溶剂冲洗较长时间，可以使“倒伏”的官能团回复其原有状态，之前用5%甲醇水溶液洗去盐再用纯甲醇是非常地道的做法！
（3）一般不提倡对Kromasil柱使用纯水流动相。非要这样用，我也建议你用预柱，缩短使用时间；及时冲洗、隔夜封存于纯有机溶剂都是很好的柱维护措施。
另外，是否可在流动相中添加5%的甲醇或乙腈，如不影响分离情况和峰形的话。
其它类型的C18也有这种现象，只是没有Kromasil柱明显。为了克服纯水溶剂长时间运行产生“水性坍塌”对色谱柱分离造成的影响，现在市场上有多种新型的色谱柱可以在100％水相中使用（如带AQ标识），稳定性良好。

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阿du

第1楼2008/05/08

支持这样的原创，在现象的基础上，深入探讨，找出原因及普遍性规律（因素），为大家提供了很好的学习的范例。
对楼主的新书很期待

0

flyaway

第2楼2008/05/08

恐龙老师的贴果然有水准
不过抱歉，我不敢加精华，怕被骂～～～～～～

0

风烟

第3楼2008/05/08

相同的柱子，相同的问题我也遇到过。
这种情况多在新柱子使用不久后出现的，或者刚使用。
我们管这叫“柱子中毒”，用甲醇或乙腈多冲洗冲洗效果不错。
也感谢您如此详尽的阐述，辛苦啦，谢谢……

0

wang19870711

第4楼2008/05/08

fvcvjhvhbnl

0

luluyang521

第5楼2008/12/09

这本书先已问世拉，2008.12.15色谱网网上订购全面开始，请及时关注哦

0

zealoy1983

第6楼2008/12/09

施老师，嘿嘿，长知识啦

0

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