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【求助】液相梯度洗脱中出现一堆杂乱的色谱峰

  • jiangxiaofeng10
    2008/12/05
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 本人做梯度洗脱,流动相为乙腈-0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液,在0—45min中内,乙腈比例0—90%。每次在32min左右(乙腈比例约50%)时出现一堆超大的杂志峰,不干扰样品峰,进空白也出峰,是不是流动相被污染了?或者是其他原因。请各位指点一下
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  • tanggangfeng

    第1楼2008/12/05

    1)水相不干净
    水最好新配的,还有水相通道经常要用甲醇或乙腈冲洗,防止长菌类。

    2)柱子脏了,没有冲洗干净。
    用甲醇或乙腈多冲一会 ,再连续的走梯度洗。冲柱子前,先用甲醇或乙腈冲洗下,水相的通道。

    jiangxiaofeng10 发表:本人做梯度洗脱,流动相为乙腈-0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液,在0—45min中内,乙腈比例0—90%。每次在32min左右(乙腈比例约50%)时出现一堆超大的杂志峰,不干扰样品峰,进空白也出峰,是不是流动相被污染了?或者是其他原因。请各位指点一下

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  • sdzb1982

    第2楼2008/12/05

    应助达人

    1、柱子严重污染了,最好用纯乙腈或二氯甲烷:甲醇 (上面1:1)冲一下。
    2、也有可能是管路污染了,有机相浓度升高以后,上面的污染物就会冲下来。可用30%稀酸冲一下(不 要接柱子)。

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  • Easy-Boy

    第3楼2008/12/06

    一般很正常的,估计是在这个比例下流动相中的杂质集中出峰。

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  • Easy-Boy

    第4楼2008/12/06

    可以使用扣减空白的方法将其除去。

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  • dickwang2008

    第5楼2008/12/06

    那你进一针纯甲醇或者水怎么样,可以看看。

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  • xy200609

    第6楼2008/12/06

    这是正常的,只要扣除空白而不干扰测定结果就行。如果效果好一点,最好用好的超纯水、色谱纯乙腈、色谱试剂,可能杂峰要小些。

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  • It is me!

    第7楼2008/12/06

    多冲洗柱子,然后再走.梯度经常出现奇怪的峰,不能要求完美的.

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  • Tinacrysta

    第8楼2008/12/06

    这种情况我碰巧也遇到过,咨询了很多老师,也像楼上的老师们说的,排除了很多原因,流动相,水,检测器,泵,管路全部清洗,乙腈换进口的,试了几种品牌,杂峰减小了,并没有消失,进溶剂也一样,因为杂峰影响到了检测,必须除去,我又换了另一台新仪器,依然如故,
    后来分析所有能换的都换了,只有色谱柱了,因为当时用的也是新柱子(国产),所以没考虑,在我的一再要求下,终于逼得领导买来一颗安捷伦的色谱柱,这颗柱子一装上,就解决问题了。看来国产品牌的柱子做梯度还是有弱点

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  • tanggangfeng

    第9楼2008/12/06

    我们也是走梯度的,下面两张图谱,是两个牌子的乙腈。
    乙腈走梯度,会有一个小杂质,ms打出来的分子量是301 ,个人认为是乙腈聚合物。(乙腈纯度越高越容易聚合)。
    如果柱子冲洗干净,流动相干净,不应该有大包峰。
    2个牌子乙腈走梯度的截图

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  • tanghongmin

    第10楼2008/12/07

    不用色谱柱,两通短接走一针水或流动相,看有没有杂质峰,如有则是流路脏,同以上楼主所言,清洗流路(主要是进样针和进样阀)即可;如没有则是色谱柱的问题,更换或清洗柱子即可。

    jiangxiaofeng10 发表:本人做梯度洗脱,流动相为乙腈-0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液,在0—45min中内,乙腈比例0—90%。每次在32min左右(乙腈比例约50%)时出现一堆超大的杂志峰,不干扰样品峰,进空白也出峰,是不是流动相被污染了?或者是其他原因。请各位指点一下

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