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【分享】近期几个技术性的新手求助帖整理

老多_小多

2008/12/25

液相色谱（LC）

版面的求助帖很多，大家都想来学习。我选了近期比较好的几个技术性的新手求助帖做了整理，希望对新手的学习有所帮助。

jianghe67发帖：我用液相色谱作了一个样品，其他条件不变，流动相用甲醇和水，80比20封形好，但没有完全分开，70比30和85比15能分开，但又拖尾现象，是什么原因？
回复帖整理：通过调节流动相的酸碱性，加入缓冲盐或三乙胺等看看效果。HPLC－消除拖尾的方法http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20080723/1371028/

starseayang发帖：在不同的紫外吸收波长处，主峰和杂质峰分离效果不一样，请问应该怎样确定波长？是选分离好一些的做波长吗？
回复帖整理：最好对样品进行全波长扫描，确定主成品的最大吸收后再选择检测波长，如果你用的质量不太好的色谱柱，换一根不同批次的就很有可能需要重新调整流动相系统。最好是做条件时给后面的不确定发生的情况留有余地。如果还可以的话，选用一个内标物。如果不好，最好再选另外一个较大吸收波长。做有关物质时要获得主峰与杂质的良好分离度和杂质能得到良好的体现为前提原则。

cjx1964_1发帖：本人最近用waters液相色谱仪2174荧光检测器测一个衍生化样品时,不时有很大一个或两个倒峰出现,请问是些什么原因会出现这种现象呢?怎么注意或解决这一问题?
回复帖整理：出倒峰是很正常的事，是受到样品中某些物质的影响。如果不影响被检测物的分离可以不用管它。

zxc198502发帖：使用正相柱子（如硅胶柱）新柱子该用什么溶剂进行活化？
回复帖整理：般来说你的色谱新柱里面是什么溶剂保存的就用那个溶剂活化，最好咨询柱子的供应商，每家的填料可能会有不同。通常硅胶柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次冲洗，然后再以相反顺序依次冲洗，所有溶剂都必须严格脱水。甲醇能洗去残留的强极性杂质，已烷使硅胶表面重新活化。

xianrenzhang520发帖：为什么液相色谱中，在检测样品时会出现倒峰，而且这个倒峰还可以作为死时间的标记？
回复帖整理：死时间：指不保留物质出峰时间，进样过程中，样品中的部分溶剂在色谱柱上没有保留，而其吸收度又小于流动相的吸收时，就出现倒峰，也因此可以近似作为死时间。

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老多_小多

第1楼2008/12/25

整理有问题吗？似乎不受欢迎啊

0

wyp198

第2楼2008/12/25

整理的相当好了。

0

Easy-Boy

第3楼2008/12/26

不错哦，辛苦了。

0

hotdog2006

第4楼2008/12/28

非常好，像我这样的新手正需要。
emoc98311 发表:版面的求助帖很多，大家都想来学习。我选了近期比较好的几个技术性的新手求助帖做了整理，希望对新手的学习有所帮助。

jianghe67发帖：我用液相色谱作了一个样品，其他条件不变，流动相用甲醇和水，80比20封形好，但没有完全分开，70比30和85比15能分开，但又拖尾现象，是什么原因？
回复帖整理：通过调节流动相的酸碱性，加入缓冲盐或三乙胺等看看效果。HPLC－消除拖尾的方法http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20080723/1371028/

starseayang发帖：在不同的紫外吸收波长处，主峰和杂质峰分离效果不一样，请问应该怎样确定波长？是选分离好一些的做波长吗？
回复帖整理：最好对样品进行全波长扫描，确定主成品的最大吸收后再选择检测波长，如果你用的质量不太好的色谱柱，换一根不同批次的就很有可能需要重新调整流动相系统。最好是做条件时给后面的不确定发生的情况留有余地。如果还可以的话，选用一个内标物。如果不好，最好再选另外一个较大吸收波长。做有关物质时要获得主峰与杂质的良好分离度和杂质能得到良好的体现为前提原则。

cjx1964_1发帖：本人最近用waters液相色谱仪2174荧光检测器测一个衍生化样品时,不时有很大一个或两个倒峰出现,请问是些什么原因会出现这种现象呢?怎么注意或解决这一问题?
回复帖整理：出倒峰是很正常的事，是受到样品中某些物质的影响。如果不影响被检测物的分离可以不用管它。

zxc198502发帖：使用正相柱子（如硅胶柱）新柱子该用什么溶剂进行活化？
回复帖整理：般来说你的色谱新柱里面是什么溶剂保存的就用那个溶剂活化，最好咨询柱子的供应商，每家的填料可能会有不同。通常硅胶柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次冲洗，然后再以相反顺序依次冲洗，所有溶剂都必须严格脱水。甲醇能洗去残留的强极性杂质，已烷使硅胶表面重新活化。

xianrenzhang520发帖：为什么液相色谱中，在检测样品时会出现倒峰，而且这个倒峰还可以作为死时间的标记？
回复帖整理：死时间：指不保留物质出峰时间，进样过程中，样品中的部分溶剂在色谱柱上没有保留，而其吸收度又小于流动相的吸收时，就出现倒峰，也因此可以近似作为死时间。

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It is me!

第5楼2008/12/29

很多时候不知道在忙啥，时间有限，很多帖子都是匆匆而过。整理一下的确挺好的。

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