皮皮鱼
第1楼2009/09/23
液体微量注射器进样,可能存在两方面的问题。
1、所取样品的代表性问题。
注射器内部容易积存样品,取样到注射器内的样品,是否能够代表实际样品?
2、柱内样品的代表性问题。
样品在汽化室是否存在针头效应和分流歧视,能否正确代表实际样品?
只有解决这两个问题,才能解决液体样品的正确进样。
首先谈谈第一个问题。如何取得合适的样品?在我看来,可以对进样取样过程进行分解来解决,这主要分为以下几步。
1、外部洗针。
一个未知样品,要首先用注射器进行洗针。习惯上常量样品吸取足量样品并排放到样品瓶外3次;微量样品6次。是不是必须这么多次?看情况。一直用来分析含量稳定同一样品的注射器,甚至可以不外洗。但不清楚样品和注射器情况的时候,这样比较稳妥。
2、内部洗针。
用注射器抽取一定样品,并把这些样品推回样品瓶。内洗次数习惯上与外洗次数相同。同样,这个没有确切规定,我的习惯是洗更多一些次数。
3、取样品。
用注射器抽取一定样品。这里我们要注意:无论外洗、内洗,都应该采用慢拉快推的办法,只有这样才有有效吸取样品,避免样品在针头内产生的负压下汽化形成气泡,避免气泡的问题就不多说了。外洗的针杆行程应该是最长的,内洗次之,取样更次之。但取样的行程,应该超过实际样品进样量。由此我个人认为,最终取样量不应该超过针杆行程的一半。也就是说,10ul的注射器,最多用来进5ul样品,不能更多。
4、定容。
定容似乎很简单,就是把样品量定容到需要的量。但我们说,定容应该针尖向上。同时,定容的时候,是否需要用一片滤纸挡住针头?是否定容后应该用滤纸擦拭一下针头?这个问题留下来,希望大家能回答一下。
5、进样。
把定好容的样品,进入色谱仪。似乎这一步很简单,真的简单么?我们来看看。
第一个问题:进样的时候,手指是否应该停留在注射器针杆上方?回答是不能。如果手指在针杆上方,进样的时候,很容易因为紧张而在完全插入前就碰到针杆,造成体积不准确。
第二个问题:如果柱前压高,不顶住针杆,针杆在高柱前压下飞出来怎么办?回答是用手指轻轻顶住针杆侧面。对,用拇指和中指拿住注射器,用食指轻轻顶住针杆侧面,而不是上面。
第三个问题:如果插入的时候,不幸顶到了硬东西,进不去了怎么办?回答是轻轻下压的同时拧动注射器最大180度,如果能通过,则正常进样;通不过,拔出注射器重新取样。这是因为注射器通常是坡口,拧180度,轻微的偏离可以解决。
第四个问题:推针杆应该用力快速推下么?回答是不要过于用力。用另一只手的手指,或者顶住针杆侧面的食指,大小适中的快速拍下去,对,轻轻的拍下去,能够感受到针杆打在底上,但又不会造成针杆弯曲就是最合适的力气。注意:拍下去之后,手指不要离开,要一直按住针杆,直到拔出。否则高的柱前压可能造成针杆飞出。
第五个问题:还有问题????是的,第五个问题是拍下后是否应该立刻拔出注射器。回答是不能。应该停留2-3s后快速拔出注射器。快速拔出在某些时候是有利的,但更多时候停留2s才是更稳定的方法。
经常有人说:内标法对进样量不在乎,为什么我用内标法进样,还是重复性很差?我可以肯定的告诉你,是你上面这些步骤,做的不到位。如果做到位,那么一切就会不同了。