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【求助】GPC样品如果超过柱子的分离上限会怎么样?

凝胶色谱(GPC)

  • 最近组建了WATERS 2695+2489+protein-pak 的一个GPC体系,柱子的分离范围是1000-20000,现在我想跑一个蛋白混合样品,其最大分子量的上限超过了20000,我想知道可不可以用这个柱子分离?误差会有多大?
    还有如何选择合适的标准品,是不是标准品的范围也不能超过20000这个上限?
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  • flyaway

    第1楼2009/11/20

    也不会怎么样,测不准而已。

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  • rasree02

    第2楼2009/11/22

    能说的具体点吗。。。我刚接触GPC不久,那我选标准品的时候,应该怎么选择呢?能不能用超过柱子分离范围的标准品呢?
    因为Empower软件的数据都是根据标准品画得曲线来的,如果我的标准品做的不够大,那么数据就会少

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  • 有水有渝

    第3楼2009/11/22

    应助达人

    不能换一根测试范围大的柱子吗?样品分子量一定要在标准曲线范围内才行。

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  • liumanlan

    第4楼2009/11/22

    由于操作疏忽,温度超过了柱子的最高使用温度20度已个小时,请问柱子还可以用吗?

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  • 柏坡

    第5楼2009/11/22

    做下柱测试,多少会有影响,甚至不可用了。

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  • sunny_windy110

    第6楼2009/12/13

    超出柱子的分离上限后,理论上的淋洗行为时大于20000的样品一起淋洗出来,那个淋洗峰就会起峰非常陡峭,不是对称的高斯峰

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  • hyhlly

    第7楼2009/12/13

    样品分子量超过GPC柱的测量上限时就会发生全排阻,换句话说就是对样品得保留很弱。那么样品组分很快就会流出,达不到足够的分辨率,当然前提是分子量大得不多。而且个人认为混床线性柱可能弹性范围会稍大些。
    至于说标准样应该是可以超过柱的检测上限的,安捷伦的PLgel MIXED-凝胶柱分子量上限为2M,但是所配置的标样最高的却达到了5M。而且所作的标准曲线线性仍然很好。

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  • lwlwb

    第8楼2009/12/23

    超过柱子最大分子量的组份会在同一时间出峰,你拿不到这部分数据是肯定的。

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  • shandian709

    第9楼2010/01/09

    大于分离极限的物质会一起首先被淋洗出来,测定的物质分子量必须在柱子的分离范围内。

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