【求助】求助：glu和gaba的浓度与峰面积的线性关系极差？

应助达人

检测方法是成熟的吗？OPA加入的量是不是足够，衍生过程是否完全等有没有检查过？

多谢！

检测方法就是用参考文献的，都大同小异，缓冲盐控制ph值6.0，然后用缓冲盐与甲醇混合梯度冲洗。

OPA加入的量应该是足够的，因为用同样剂量OPA衍生剂衍生1uM，2.5uM，5uM，10uM的glu和gaba的时候，线性就很好。

衍生时间是90秒，但是不知道该怎么判定衍生完全。

应助达人

那你能不能把样品也处理到线性好的范围内呢，衍生后的样品是否稳定，如果稳定，那么衍生90s，与衍生10min和20min的比较，面积应该是一样的，如果后的更大，那就可能衍生时间要延长了，我想10-100的浓度也可能不在浓度不在线性范围内才不成线性。

OPA与上述氨基酸反应90s反应最完全，时间长了就不稳定了。我一般是读秒90s后加入反应终止剂，结果还是线性差。