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【讨论】柱子反装,时间漂移

  • guangdongzai1
    2009/12/06
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 昨天工作时,按美国药典,用液相测哌拉西林的含量,第一针结果就显示氨苄西林和哌拉西林的分离度不合格,因为没有柱子可以替代了,只好寻求别的解决办法。同事首先建议将分离度溶液稀释后试试,可惜这招不灵,分离度更低了;后来色谱柱管理员发话了,把柱子反装试试。装好后,平衡大概5分钟(甚至不到),立即进样,分离度合格了,见到这结果实在太高兴了。就没想太多别的,例如系统稳定不稳定的问题。接下来,就出现使实验无法进行下去的问题:每一针的保留时间都在变化。前六针是向前飘,后五针又大幅向后飘,最终超出正负0.05的漂移范围。主管无奈地宣告实验失败。
    之后大家分析原因,只是认为柱温的影响,真是一个很没有说服能力的解释。经仔细回想,终于找到令自己满意的解释:因为当时为了及时完成任务,自己太着急了,柱子反装后没有充分平衡,见分离度合格后就立即进样,导致如此。
    总结:在有柱温箱的前提下,保留时间飘移,很可能是柱子没有平衡好。心急吃不了热豆腐啊。
    疑惑:柱子在反装之前已经平衡过了,为什么反装后还需平衡呢?柱子里的微观结构是怎样的?望知者不吝赐教!
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  • 有水有渝

    第1楼2009/12/06

    应助达人

    反装后可能引起进料的松动等,还有色谱柱前可能有些污染物会被冲出,所以反装的时候,开始时最好不要接入检测器。所以要平衡,最好也要长一点,保留时间漂移才0.05是什么单位,如果是min那就已经很小了,不知道你的定的标准是什么?

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  • 柏坡

    第2楼2009/12/06

    柱子一反一正,对柱内环境的改变时很大的,正反接可以理解成为两个单独系统,所以平衡起来都需要一定的时间。不建议正反交替食用。

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  • liu198315

    第3楼2009/12/07

    最好不要交替使用。这样柱子容易坏

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  • 哇咔咔

    第4楼2009/12/07

    是啊,看到你说平衡5min没到.就进样.就知道肯定要漂移,反装后相对于柱内整个硅胶的洗脱顺序就反了.以前的柱尾是柱前,相对于柱内按原来方向积攒的不同物质的吸附量的改变,就好比你把层析用柱子反过来用,肯定还是要重新洗柱子是一样.所以肯定是要重新平衡系统.

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  • small_fish

    第5楼2009/12/07

    反装柱子,对色谱柱的伤害非常大,建议一般情况下不要将柱子反装,如果柱子压力过高,冲洗不干净的时候,可以反冲一下,冲走里面的污染物,反冲时不要接检测器

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  • cjhck

    第6楼2009/12/09

    柱子用的时间较长,柱效达不到要求,再生处理后也是如此的,可以反过来用用(死马当活马吗)。

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  • guangdongzai1

    第7楼2009/12/09

    那是正负0.05%,我暂时也不知道是怎么定的这标准。。。

    xky0230699(xky0230699) 发表:反装后可能引起进料的松动等,还有色谱柱前可能有些污染物会被冲出,所以反装的时候,开始时最好不要接入检测器。所以要平衡,最好也要长一点,保留时间漂移才0.05是什么单位,如果是min那就已经很小了,不知道你的定的标准是什么?

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  • guangdongzai1

    第8楼2009/12/09

    两个单独的系统!!第一次听到如此说法,呵呵。以后注意了

    柏坡(hgycook) 发表:柱子一反一正,对柱内环境的改变时很大的,正反接可以理解成为两个单独系统,所以平衡起来都需要一定的时间。不建议正反交替食用。

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  • guangdongzai1

    第9楼2009/12/09

    你好....好难理解那个积攒了的不同物质的吸附量的改变啊,你知道柱内硅胶的微观结构吗?它是怎么作用的?

    feixue810316(feixue810316) 发表:是啊,看到你说平衡5min没到.就进样.就知道肯定要漂移,反装后相对于柱内整个硅胶的洗脱顺序就反了.以前的柱尾是柱前,相对于柱内按原来方向积攒的不同物质的吸附量的改变,就好比你把层析用柱子反过来用,肯定还是要重新洗柱子是一样.所以肯定是要重新平衡系统.

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