去年冬天
第1楼2010/03/20
2 VITEK 系统
VITEK系统是由生物-梅里埃公司生产的全自动微生物鉴定和药敏分析系统。第一代产品有以下四个规格VITEK AMS32、60、120、240、VITEK 2。由计算机主机、孵育箱/读取器、充填机/封口机、打印机等组成。鉴定原理是根据不同微生物的理化性质不同,采用光电比色法,测定微生物分解底物导致pH改变而产生的不同颜色,来判断反应的结果。在每张卡上有30项生化反应。由计算机控制的读数器,每隔1h对各反应孔底物进行光扫描,并读数一次,动态观察反应变化。一旦鉴定卡内的终点指示孔到临界值,则指示此卡已完成。系统最后一次读数后,将所得的生物数码与菌种数据库标准菌的生物模型相比较,得到相似系统鉴定值,并自动打印出实验报告。可以鉴定革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性球菌、酵母菌、需氧芽孢杆菌、厌氧菌、奈瑟氏菌、嗜血杆菌、非发酵菌等,并可进行药敏检测,对提高工作效率起到了很大作用。
因仪器细菌鉴定是用数值分类法,它遵循的是各个生化反应“等重要原则”进行分类。而传统分类法的原则是将细菌的基本性质分为主要和次要。如果仪器鉴定结果标准化百分概率很高,而主要的生化反应不符合,它结果的准确性就值得怀疑,必须用手工试验做主要试验加以证实,否则会得出错误的结论[1]。利用VITEK专用药敏卡,可以在菌株鉴定的同时检测药物敏感性。目前已有国内文献报道检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的方法比较[2,3]。周铁丽等用纸片扩散确证法和VITEK-AMS 专用药敏卡GNS-506对临床分离的204株大肠埃希菌和70株肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测,其敏感性为77.6%,存在比较严重的假阴性,与国外报道VITEK-AMS检测ESBLs 敏感性为99.5%[4]不符。认为现有的VITEK-AMS专用检测卡虽然操作简便,特异性好,但灵敏度较低,适用于国内医院检测ESBLs[5]。
3 MicroScan系统
MicroScan系统有由主机、真空加样器、孵育箱/读取器、计算机、打印机等组成。除采用传统呈色反应法外,同时采用敏感度极高的快速荧光测定技术来检测细菌胞外酶,鉴定板有普通板和快速板两种,普通板获得结果需要16~18h,快速板测定只需2~3.5h。该系统有8种鉴定反应板,可鉴定包括革兰阴性菌、革兰阳性菌、厌氧菌、酵母菌、嗜血杆菌和奈瑟菌等近800种细菌。药敏部分采用比浊法进行测定,90%菌株可在5.5h内获得对17~33种抗菌药物的MIC值。
为探讨自动微生物分析仪对临床常见病原菌鉴定结果的准确性,李忠新等用MicroScan 微生物分析仪对临床分离的139株病原菌进行鉴定并与API 鉴定系统的结果进行比较,以传统手工法作参考标准。结果表明,MicroScan分析仪对常见病原菌鉴定结果与API或手工法符合率在79.1%~100%之间,非发酵菌鉴定的符合率最低,与文献报道[6]一致。非发酵菌鉴定符合率低的原因可能与生化反应试剂不稳定、细菌在反应板中生长不充分、细菌代谢能力差等因素有关。因此,在使用MicroScan分析仪进行非发酵病原菌鉴定时,需要时可增加必要的手工试验,以提高实验结果的准确性[7]。据西班牙报道,临床通过MicroScan分离的55株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)经过双向PCRmecA基因检测证实,有5株为错误的病原分型[8]。利用药敏复合板同样可以进行诱导β-内酰胺酶的检测,能较好地补充常规药敏试验对细菌耐药表达的不足,使实验室的药敏结果更符合临床实际,更能准确地指导临床用药[9]。
去年冬天
第2楼2010/03/20
4 PHOENIXTM 系统
PHOENIXTM 系统是新一代全自动快速细菌鉴定/药敏系统,由BD公司生产。鉴定试验采用BD专利荧光增强技术与传统酶、底物生化呈色反应相结合的原理。药敏试验采用传统比浊法和BD专利呈色(Chromogenic)反应双重标准进行药敏试验结果判断。仪器由主机、比浊仪、微生物专家系统等组成。有PHOENIXTM 100或5 0 二种型号。PHOENIXTM 100型分别可
进行100个鉴定试验和100个药敏试验。可鉴定革兰氏阳性菌139种、革兰氏阴性菌158种。有鉴定板、药敏板或鉴定/药敏复合板3种可供选择。每个鉴定药敏复合板有51孔用于鉴定试验,85孔用于药敏试验,可同时进行17种抗菌素5种浓度或28种抗菌素3种浓度的MIC药敏试验。90%细菌的鉴定在3~6 h完成,鉴定准确率大于90%,85%的细菌药敏试验在4~6h内出结果。
美国疾病预防控制中心分别采用纸片扩散法、Etest、MicroScan WalkAway、BD Phoenix、VITEK、VITEK2与肉汤微量稀释法做对比,检测50株葡萄球菌、50株肠球菌的耐药性[10],结果显示,类别一致性:MicroScan最高(96%),其他方法依次为:VITEK 2(93.0%)、Etest(90.0%)、Phoenix(89.6%)、纸片扩散法(88.0%)、VITEK(85.9%);MIC符合水平:MicroScan(99.0%)、Phoenix(95.8%)、VITEK2(92.0%)、Etest(92.0%)、VITEK(85.9%);葡萄球菌主要错误率:VITEK (35.7%)、 Etest(40.0%)、制片扩散法(53.3%),肠球菌主要错误率VITEK(20.0%)。
自动化鉴定系统是根据数据库中所提供的背景资料鉴定细菌,数据库资料的不完整将直接影响鉴定的准确性。目前为止,尚无一个鉴定系统能包括所有的细菌鉴定资料。对细菌的分类是根据传统的分类方法,因此鉴定也以传统的手工鉴定方法为“金标准”。使用自动化鉴定仪的实验室,应对技术人员进行手工鉴定基础与操作技能培训。细菌的分类系统随着人们对细菌本质认识的加深而不断演变,使用自动化鉴定仪的实验室应经常与生产厂家联系,及时更新数据库。实验室技术人员应了解细菌分类的最新变化,便于在系统更新之前即可进行手工修改。通过自动化鉴定仪得出的结果,必须与其它已获得的生物性状(如标本来源、菌落特征及其它的生理生化特征)进行核对,以避免错误的鉴定。参考文献
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[7]李忠新, 周小梅, 李伟雄,等.MicroScan AS24 自动微生物分析仪鉴定139 株常见病原菌结果分析.上海医学检验杂志,2003,18(2):86.
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[10]Tenover FC, Williams PP, Stocker S,etal. Accuracy of sixantimicrobial susceptibility methods for testing linezolid againststaphylococci and enterococci. J Clin Microbiol. 2007,9,45(9):2917-2922.
作者单位:130021吉林省前卫医院