【求助】关于HPLC测定法的吸收波长确定

你的做法是对的，选择5个当中最合适的一个做
都是你既然有DAD，为什么不用全波长扫描做呢
标准中也没要求一定要最佳吸收波长的

应助达人

要求最佳吸收波长做，但不一定是最大吸收波长，最适合的才是最好的。

DAD收集200-400（700）nm全部数据，分别进空白和标准样品，三维谱图可以清晰地帮助你选择吸收波长。原则是：干扰物吸收尽量小，目标物尽量吸收尽量大！

推荐 326nm 276nm 同时采集不就可以啦，分别能得到分辨率高的色谱图！只要标准样品和试样在同样的采集参数下测试，对于结果的测定没有什么影响！

应助工程师

当测得混合物时，紫外波长的选择一般是比较折中的态度，就是选大家在这个波长下都有不是很低的紫外吸收，效果最好，就是兼顾所有！

我的DAD是全波长扫描的，但是如果是制定质量标准的话，不是所有的仪器设备都带全波长扫描的，所以我就在想，在最大吸收波长处的含量和在最小吸收波长处的含量之间是否一样，根据考察结果来看，基本上没有差别。
现在就是有个问题，用什么统计方法来说明两者之间没有差别，换句话说测定波长可以不是该物质的最大吸收波长。
请高手指点！是不是仅仅计算偏差和标准偏差就行了吗？个人感觉总少了点什么。

测得的数据用何统计方法进行处理，请高手指点！

还有一点需要说明的，就是最大吸收波长并不是固定的，一般会有2-3nm变动，就像我第一天扫描绿原酸的最大吸收波长在326nm，第二扫描同一份对照品时（中间没有任何变动，仅仅是放置了不到20个小时）最大吸收波长为327nm。

所以说，个人认为测定波长不一定为最大吸收波长，但是你选择非最大吸收波长时，要说明你选择该波长的理由。

应助达人

放置后最大吸收波长有变化，可能是你的样品降解了，忘了药典最大吸收波长的波动是0.5还1.0nm,反正是肯定不能超过1.0的。选择它的理由就是稳定，干扰少（特别是检测含量时），能通过方法学的各项验证。

同意这个观点：你既然有DAD，为什么不用全波长扫描做呢？？？