仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
1
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
光谱
>
紫外可见分光光度计(UV)
>
帖子详情
【资料】分光光度计的应用3-比色法测定蛋白质
这站不远
2010/07/09
私聊
紫外可见分光光度计(UV)
比色法蛋白质定量
蛋白质通常是多种蛋白质的化合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度。
比色方法一般有
BCA
,
Bradford
,
Lowry
等几种方法。
Lowry
法:以最早期的
Biuret
反应为基础,并有所改进。蛋白质与
Cu2+
反应,产生蓝色的反应物。但是与
Biuret
相比,
Lowry
法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂;反应需要的时间较长;容易受到非蛋白物质的影响;含
EDTA
,
Triton x-100
,
ammonia sulfate
等物质的蛋白不适合此种方法。
BCA
(
Bicinchoninine acid assay
)法:这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与
Cu2+
反应产生
Cu+
,后者与
BCA
形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在
562 nm
波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强,反应后形成的化合物非常稳定。相对于
Lowry
法,操作简单,敏感度高。但是与
Lowry
法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。
Bradford
法:这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应,产生的有色化合物吸收峰
595 nm
。其最大的特点是,敏感度好,是
Lowry
和
BCA
两种测试方法的
2
倍;操作更简单,速度更快;只需要一种反应试剂;化合物可以稳定
1
小时,方便结果;而且与一系列干扰
Lowry
,
BCA
反应的还原剂(如
DTT
,巯基乙醇)相容。但是对于去污剂依然是敏感的。最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大,无可比性。
某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致,感到迷惑,究竟该相信哪种方法?由于各种方法反应的基团以及显色基团不一,所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性。例如:
Keller
等测试人奶中的蛋白,结果
Lowry
,
BCA
测出的浓度明显高于
Bradford
,差异显著。即使是测定同一样品,同一种比色法选择的标准样品不一致,测试后的浓度也不一致。如用
Lowry
测试细胞匀浆中的蛋白质,以
BSA
作标准品,浓度
1.34 mg / ml
,以
a
球蛋白作标准品,浓度
2.64 mg /ml
。因此,在选择比色法之前,最好是参照要测试的样本的化学构成,寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。另外,比色法定量蛋白质,经常出现的问题是样品的吸光值太低,导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大。关键问题是,反应后的颜色是有一定的半衰期,所以每种比色法都列出了反应测试时间,所有的样品(包括标准样品),都必须在此时间内测试。时间过长,得到的吸光值变小,换算的浓度值降低。除此,反应温度、溶液
PH
值等都是影响实验的重要原因。此外,非常重要的是,最好是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材质的比色杯,因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色,导致样品吸光值不准确。
相关话题
1
关于硫化物盲样考核的问题
2
紫外钨灯能量高
3
GDYS-101SC2水中臭氧测定仪原理及电路解析
4
日立U3310紫外可见分光光度计问题求助
5
UV-2600 2700有什么区别
+关注
私聊
初学者&九点虎
第1楼
2010/07/10
不知道楼主有没有和凯式定氮法做过比较
0
发表回复
近期热榜
迎国庆送壕礼!十月发帖抢大疆云台
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
喜迎国庆!第十七届原创大赛超级原创日参赛奖励翻倍
丹纳赫四十周年寄语征集领大礼包
热门活动
【售后专场--招聘会】
第三届微课大赛投票进行中ing
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
紫外风光光度计法测钛含量总是0和1跳动
已应助
2024/04/07
【分享】请教各位高手:标准工作曲线的线性范围的上下限应该怎么计算?谢谢
2007/01/11
分光光度使用经验点滴(转帖)
2006/05/22
求助 岛津uv1750分光光度计空白调零怎么调
已应助
2015/03/30
【求助】求助:吸光系数为多少?
2010/04/16
【原创】求救——购买国产紫外分光光度计
2010/01/25
【资料】氧化物半导体材料的禁带宽度实验研究
2010/05/16
空气中五氧化二磷的曲线吸光度超过1了,是什么原因,为什么不可以大于1,第一次做无机不是很懂,请指导
已应助
2019/04/30
【仪器心得】岛津UV-2600紫外分光光度计使用心得
第十七届原创
2024/10/02
紫外分光光度法测定蛋白质的操作基本步骤和原理
分享
2024/09/23
全自动尿液分析仪:选择指南与使用心得分享
分享
2024/09/23
紫外可见光测量吸光度中干扰消除
分享
2024/09/23
求助,想找人开发2个分光光度计的显色剂,有能做的朋友联系我,谢谢!
求助
2024/09/23
紫外全波长扫描的样品浓度应该在什么范围?
已应助
2024/09/21
第一次配硫化氢标准曲线
第十七届原创
2024/09/18
SH-270阴离子表面活性剂分析仪使用心得
第十七届原创
2024/09/18
用实力证明 - 技术人员能力好坏“我说行就行”的时代过去了?
第十七届原创
2024/10/02
同一个部门的人进门还让登记,宝宝很生气!
第十七届原创
2024/10/03
气象色谱仪显示ALS 故障代码 153是什么情况
求助
2024/09/27
环境空气氮氧化物曲线斜率偏高怎么办
已应助
2024/09/27
出峰时间和分子离子峰一样,二级质谱图不一样是同种物质吗
求助
2024/09/28
玻璃器皿的质保期
求助
2024/09/28
关于CNAS-G001:2024里的条款理解?
求助
2024/09/30
岛津2014色谱TCD检测标气中的氧气和氮气,氧气不出峰怎么处理
求助
2024/09/29
【资料】分光光度计的应用2-蛋白质的测定
2010/07/09
【资料】分光光度计的应用1- 核酸的定量
2010/07/09
【资料】分光光度法!!!
2010/07/09
【原创】又到昙花开花时
2010/07/09
【转帖】置 顶 帖 分 割 线-------------禁 止 发 帖------------
2010/07/09
【分享】【分享】(书籍)衡器计量——2004最新版
2010/07/09
【求助】关于C18柱的离子对试剂
2010/07/09
【求助】有没有甲酯化效率高的方法?
2010/07/09
品牌合作伙伴
丹纳赫苏州基地 打工人的梦想
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...