【第三届原创大赛】油菜种子脂肪酸提取与含油量测定(应要求更新数据)

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这个方法是我摸过各种条件后开始应用的，对于水浴或超声、是否加甲苯、是否一定要氮吹等均做过比较实验，可以说现在建立的这个是一个比较成熟的方法了，去年我用它测了800多个样，测的数据比较准确，有做脂肪酸测定的朋友们可以参考！

油菜种子脂肪酸提取与含油量测定（水浴法）
1、试剂：
甲醇 分析纯；甲苯 分析纯；正己烷 分析纯；石油醚（90-120℃）分析纯； 2,6-二叔丁基对甲酚（BHT） 化学纯；氯化钠 化学纯；浓硫酸 分析纯； Methyl heptadecanoate(C18H36O2)作内标；
2、实验步骤：
⑴ 试剂配制：5%（体积百分比）浓硫酸/甲醇溶液；0.2%（质量百分比）BHT/甲醇溶液；2.5mg/ml碳十七脂肪酸甲酯/石油醚（90-120℃）溶液；0.9%（质量百分比）NaCl/水溶液；
⑵ 在分析天平上称5颗（约10-25mg）大小形态相似、质量相近的油菜种子加入20ml钳口顶空瓶中，用玻棒将其捣碎，加入5%浓硫酸甲醇溶液2mL（分两次加，每次1ml），将玻棒冲洗干净后依次向瓶中加入如下试剂：0.2%BHT溶液25µL，甲苯300µL；
⑶ 用压盖器将顶空瓶用带聚四氟乙烯垫的铝盖封好，将上述混合物轻微晃动混匀，然后于恒温水浴锅中90~95℃水浴1.5h提取；
⑷ 提取结束后取出冷却至室温，用启盖器启盖后加入100µL 2.5mg/mL碳十七脂肪酸甲酯作内标，再加入0.9%NaCl 2mL，稍微振荡，用3mL正己烷萃取，萃取时用移液枪取上清液再吹入瓶中，反复3-4次以保证萃取完全，将上清液转移至10mL离心管中；
⑸ 得到的萃取物在氮吹仪下吹干，然后用1mL的正己烷溶解定容，涡旋2-3s，再离心（转速4500rpm、时间5min、温度4℃）取上清液；
⑹ 进行气相色谱分析（气相色谱仪的工作条件：FID氢火焰离子化检测器，HP-INNOWax色谱柱，进样口温度250℃，分流比80:1，检测器温度260℃，色谱柱初温210℃，9min，程序升温20℃/min，升至230℃，并在此温度下维持8min）；
3、油菜种子油脂含量的计算
计算公式：油脂含量%＝(S1/S2)×N/M
S1— 总峰面积； S2— 内标峰面积；
N — 内标用量； M— 种子质量。
同一样品进行2~3次提取实验，所得结果间的差异应在2%以内，再取平均值。
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