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【求助】一头雾水的分离纯化,请前辈帮忙~

液相色谱(LC)

  • 菌发酵液,过3K超滤膜,取3K以下的滤液过制备液相,目的是找出一种活性物质,但完全不知道这是一种什么物质,有可能是有机酸也有可能是小分子肽,过制备液相用的是甲醇-三氟乙酸,30min甲醇从10%-100%.。用的C18反相柱。出来的峰形很差,分不太开,但基本确定物质在前面4-7分钟左右出来的,极性比较大的物质。请问应该怎样改变条件,让峰形好一些,或者有没有其他的分离纯化思路?谢谢了!!!!
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  • avayf

    第1楼2010/12/23

    30分钟的方法,4-7分钟就出来了,保留太小了,看你梯度也挺缓的了。换根柱子试试吧。

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  • avayf

    第2楼2010/12/23

    你们有极性大柱子吗?
    肽应该是含氮化合物吧,知道一款波士顿的色谱柱,分离含氮化合物和大极性化合物很好。 BOSTON CREST PREMIUM ODS 柱,供你参考。

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  • redrumcha

    第3楼2010/12/23

    恩,可以换根极性强的柱子,或者试试极性更弱的离子对试剂。

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  • 〓猪哥哥〓

    第4楼2010/12/23

    既然是极性的东西,用氯仿,石油醚先除杂纯化后再进液相。制备色谱一般不管峰型,只要分离度足够好就行

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  • hujiangtao

    第5楼2010/12/24

    应助达人

    换极性柱或加离子对

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  • 〓猪哥哥〓

    第6楼2010/12/25

    调整下比例,峰可以在10min左右出峰的。我觉得楼主先应该纯化样品,以免很快污染色谱柱

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  • ynmzlixin

    第8楼2010/12/28

    分不开,肯定要换填料啊

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  • 阿三

    第9楼2010/12/28

    发酵液很杂的 楼主没有做前期工作就做液相制备吗? 估计不是峰型不好,而是杂质太多 根本没分开

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  • 阿三

    第10楼2010/12/28

    发酵产物分离我们也做过 直接液相制备 想都没想过 前期工作量也很大 建议楼主过下凝胶层析柱 效果会有很大改观

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