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【讨论】关于皮革奶检测的一点小想法

  • 初学者&九点虎
    2011/02/19
  • 私聊

乳制品检测

  • 皮革奶和三聚氰胺都是由牛奶中的蛋白闹的,所以一起先看看牛奶中蛋白的成分:
    牛奶中含有3种主要的蛋白质,其中酪蛋白的含量最多,约占总蛋白量的83%,乳白蛋白占13%左右,乳球蛋白和少量的脂肪球膜蛋白约占4%左右。乳白蛋白中含有营养所必需的各种氨基酸,是一种全价蛋白。
    不知道皮革水解物中的蛋白是什么样的蛋白质,从检测的角度来说,可以检测牛奶中的酪蛋白,如果含量在83%左右,就可确定其为牛奶,如果这一比例相差很远的话,就可能是皮革奶。但这一前提是皮革水解物不含酪蛋白。
    如果皮革水解物中含有酪蛋白,那就检测乳白蛋白。
    检测方法
    1 可以利用蛋白质变性的等电点等方法将酪蛋白分开,从而进行凯式定氮法测定,确定酪蛋白的含量。
    2 蛋白质在紫外区有吸收,可以利用紫外分光光度法进行测定。
    3 可以利用显色剂茚三酮在可见区进行测定。
    4 水解后可以测定水解物中的氨基酸,利用液相色谱仪
    以上是我个人想法,没有付诸实践,不知正确与否,希望大家一起来讨论
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  • 儒雅凤

    第1楼2011/02/19

    查询结果:
    从牛奶中分离酪蛋白和乳糖
    一、引言
    牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白,含量约为35g/l。酪蛋白在乳中是以酪蛋白酸钙-磷酸钙复合体胶粒存在,
    胶粒直径约为20~800纳米,平均为100纳米。在酸或凝乳酶的作用下酪蛋白会沉淀,加工后可制得干酪或干酪素。本实验利用加酸,当达到酪蛋白等电点PH=4.7时,酪蛋白沉淀。脱脂乳中除去酪蛋白后剩下的液体为乳清,在乳清中含有乳白蛋白和乳球蛋白,还有溶解状态的乳糖,乳中糖类的99.8%以上是乳糖,可通过浓缩、结晶制取乳糖。
    二、实验材料和试剂
    脱脂乳或脱脂奶粉。
    醋酸-醋酸钠缓冲溶液(PH=4.7),95%乙醇,乙醚,碳酸钙粉末,苯肼试剂。
    三、实验步骤
    1. 从牛奶中分离酪蛋白
    在烧杯中加入2g脱脂奶粉,再加入40ml40℃,PH=4.7的醋酸-醋酸钠缓冲溶液40ml,
    用PH精密试纸检验液体的PH值。静置冷却至室温,倾去上层清液(留作分离乳糖用),剩下的悬浮液分别装入两支离心试管中,用转速为2000转/分离心分离3~5分钟,倾出上层清液,(合并于上一清液中),得酪蛋白粗品。于离心管中加入5ml蒸馏水,用玻棒充分搅拌,洗涤除去其中的水溶性杂质(如乳清蛋白,乳糖以及残留的缓冲溶液),离心后弃去上层液,再用蒸馏水洗一次。于试管中加入5ml95%乙醇,充分搅拌,离心后弃去乙醇溶液,用乙醇洗涤主要是除去磷脂类物质。最后再用5ml乙醚以同样方法洗涤,以除去脂肪类物质。将酪蛋白沉淀物凉干,称重、并计算得率。
    2. 从牛奶中分离乳糖
    在除去酪蛋白的乳清中,加入1.5g CaCO3粉末,搅拌均匀后加热至沸。加CaCO3的目的一方面是中和溶液的酸性,防止加热时乳糖水解,另方面又能使乳白蛋白沉淀。过滤除去沉淀,在滤液中加入1~2粒沸石,加热浓缩至3~5ml,加入10ml 95%乙醇(注意离开火焰)和少量活性炭,搅拌均匀后在水浴上加热至沸腾,趁热过滤,滤液必须澄清。加塞放置过夜,乳糖结晶析出,抽滤,用95%乙醇洗涤产品。
    3. 乳糖成脎试验
    取自制乳糖溶于少量水中,浓度约为5%,在试管中加入1ml乳糖溶液,1ml苯肼试剂①,摇匀,试管口用棉花塞住,在沸水浴中加热,并不时振摇,加热10~15分钟后,取出放置冷却,乳糖脎成结晶析出。取少量乳糖脎在显微镜下观察其结晶形态,可证实为乳糖。
    ①苯阱试剂有毒,小心使用,勿触及皮肤,如触及皮肤先用稀醋酸洗,再用水洗。

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  • 儒雅凤

    第2楼2011/02/19

    关于蛋白质的分离、纯化:
    一般程序可分为以下几个步骤:
    (一)材料的预处理及细胞破碎
    分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有:
    1. 机械破碎法
    这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎。常用设备有,高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。
    2. 渗透破碎法
    这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。
    3. 反复冻融法
    生物组织经冻结后,细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便,但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。
    4. 超声波法
    使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。
    5. 酶法
    如用溶菌酶破坏微生物细胞等。
    (二) 蛋白质的抽提
    通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提,抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂(十二烷基磺酸钠、tritonX-100等),使膜结构破坏,利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中,应注意温度,避免剧烈搅拌等,以防止蛋白质的变性。
    (三)蛋白质粗制品的获得
    选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法:
    1. 等电点沉淀法
    不同蛋白质的等电点不同,可用等电点沉淀法使它们相互分离。
    2. 盐析法
    不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。
    3. 有机溶剂沉淀法
    中性有机溶剂如乙醇、丙酮,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来沉淀蛋白质。此外,有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层,促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性,使用该法时,要注意在低温下操作,选择合适的有机溶剂浓度。
    (四)样品的进一步分离纯化
    用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质,须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有:凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。

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  • coffee8

    第3楼2011/02/19

    看来检测方法是有眉目了呀!

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  • 儒雅凤

    第4楼2011/02/19

    皮革的水解产物主要是氨基酸、明胶等,明胶其实是多种氨基酸,蛋白质就是多种氨基酸组成的。本身对人无害,有害物应该是皮革鞣制过程的污染物。

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  • 初学者&九点虎

    第5楼2011/02/19

    我听说用垃圾里面捡来的皮鞋做皮革水解物,可怕的是已经形成产业链,谢谢儒雅凤的资料

    儒雅凤(liwei7893) 发表:皮革的水解产物主要是氨基酸、明胶等,明胶其实是多种氨基酸,蛋白质就是多种氨基酸组成的。本身对人无害,有害物应该是皮革鞣制过程的污染物。

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  • Oliver

    第6楼2011/02/21

    皮革中胶原蛋白水解后,含有大量羟脯氨酸,牛奶中蛋白不含有这个东西,检测羟脯氨酸就可以知道是不是皮革奶了吧。

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  • 06sheng1314

    第7楼2011/02/21

    如果是用皮革‘鞣革’工艺,包括鞣制、染色等中产生的下脚料,就可能含有一些重金属。
    应该可以通过三价铬和六价铬含量的检测来判断

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  • we-july

    第8楼2011/02/22

    农业部文件有附的检测方法。如下:
    1.三聚氰胺:可采用快速法进行初步筛选,快速方法的检出限不高于0.05mg/kg。检测结果高于0.05mg/kg的样品采用《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》(GB/T 22388-2008)第二法或第三法进行确证。上报的检测结果为具体检测值。依据《卫生部、工业和信息化部、农业部、国家工商行政管理总局、国家质检总局公告》(2008年第25号)进行判定。
    2.皮革水解蛋白:依据《乳与乳制品中皮革水解蛋白鉴定-L(-)-羟脯氨酸含量测定》(卫生部指定方法)。超出方法检出限即判定为不合格。
    3.碱类物质:依据《乳与乳制品卫生标准的分析方法》(GB/T 5009.46-2003)进行检测,检出即判定为不合格。
    4.黄曲霉毒素M1:可采用快速法进行初步筛选,快速方法的检出限不高于0.1µg/kg。检测结果高于0.1µg/kg的样品采用《食品安全国家标准 乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定》(GB 5413.37-2010)第一法或第二法进行确证。上报的检测结果为具体检测值。依据《食品安全国家标准 生乳》(GB 19301-2010)进行判定。
    5.铅:依据《食品安全国家标准 食品中铅的测定》(GB 5009.12-2010)进行检测。依据《食品安全国家标准 生乳》(GB 19301-2010)进行判定。

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  • zhangyingfu138

    第9楼2011/02/22

    如果说皮革制品中的重金属会引入,那奶粉的重金属检测含量不就不合格了吗?

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  • flyfox

    第10楼2011/02/22

    直接检测L-羟脯氨酸即可。牛奶蛋白中基本上不含有该物质,而动物胶原蛋白中则有。检测方法很多,分光光度法、LC-MS/MS以及LC法。相比较分光光度法,经过LC分离可以降低其它物质的干扰,其中LC法须对样品进行衍生化以后使用UV进行检测。
    衍生试剂:2,4-二硝基氟苯,OPA/FITC等。

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