【违法添加专场1】:动物源性食品中瘦肉精的检测
瘦肉精(Clenbuterol),一类动物用药的统称。任何能够促进瘦肉生长、抑制动物脂肪生长的物质都可以叫做“瘦肉精”,是一种非常廉价的药品,对于减少脂肪增加瘦肉作用非常好。瘦肉精让猪的单位经济价值提升不少,但它有很危险的副作用,轻则导致心律不整,严重一点就会导致心脏病。
这次采用了GB/T 22286-2008方法进行牛肉中瘦肉精的检测工作。
下面简述一下该方法的步骤:
称取2.00g样本,加乙酸钠缓冲液、酶解,酶解后经震荡提取,瘦肉精溶于缓冲液中。取4ml上清分别经高氯酸、氢氧化钠调pH,再经饱和氯化钠、10ml 异丙醇-乙酸乙酯(6+4)提取,离心后的上清经氮气吹干,用5ml乙酸钠缓冲液复溶,上MCX过柱。淋洗时依次用2ml水、2ml 2%甲酸水、2ml 甲醇,抽干后用2ml 5%氨水甲醇洗脱并收集洗脱液,氮气吹干,最终用200ul 0.1%甲酸/水-甲醇溶液(95+5)。
这个方法在过柱之前比较繁琐,包括调pH和一次液液提取。粗略算下,这个方法的绝对回收率大概在10%-20%。检出限较国标略低或相当。
有几个问题:
1.有没有更为简单的前处理方法?
2.该方法的回收率是在10-20%吗?
3.水解后的上清液先用高氯酸调pH至1,离心后的上清再用氢氧化钠调pH至11的作用是什么?
4.该国标推荐用MCX柱,有没有用其他类型小柱的?
5.大家在样品分析时,都有检出哪些种类的瘦肉精?
6.国标上提到低于检出限(0.5ug/kg),均视为未检出,您是如何判断检出与否的?
7.贵实验室以哪种方式通过认证?猪肉加标盲样、标准品溶液盲样、查看文件报告?
也欢迎大家分享实验中的经验,晒晒实验图谱。
链接:
【都来说说“食品中可能违法添加的非食用物质”,哪些是您可以做的?】http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110516/3308870/
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小猪飞飞
第1楼2011/05/19
实验室目前只购买了沙丁胺醇、克伦特罗、莱克多巴胺的标准品及其同位素内标。
流动相是A:0.1%甲酸水;B: 0.1%甲酸乙腈。
流动相梯度是:
MRM条件:
名称 | PAR | DAU | DP | CE | |
克伦特罗 | clen | 277.2 | 203.1 | 33 | 20 |
259.1 | 30 | 17 | |||
莱克多巴胺 | ract | 302.4 | 164.1 | 31 | 20 |
284.2 | 32 | 16 | |||
沙丁胺醇 | salb | 240.3 | 148.1 | 29 | 23 |
222.1 | 34 | 16 | |||
D9-克伦特罗 | D9-clen | 286.3 | 204.1 | 31 | 21 |
268.2 | 33 | 19 | |||
D6-莱克多巴胺 | D6-ract | 308.4 | 168.2 | 32 | 22 |
290.3 | 31 | 17 | |||
D3-沙丁胺醇 | D3-salb | 243.4 | 151.1 | 23 | 25 |
169.2 | 24 | 16 | |||
225.2 | 24 | 16 |
johne0212
第6楼2011/05/20
1.有更简单的前处理方法,你可以参考Agilent Aplication Note 5990-7687,此方法只需要高氯酸沉淀蛋白之后,直接过SPE小柱。
2.如果你做的熟练的话,并且在SPE操作过程中没有差错,绝对回收率会在50%左右。
3.水解后调解Ph为1是为了沉淀蛋白,调节Ph为11是因为酸性条件下瘦肉精在MCX上保留不太好。
4.其他类型的阳离子复合小柱也可以用。
5.现在我们的方法只包括Clenbuterol和Ractopamine
6.这个如果你用不同LC/MS/MS,你的LoD或者CCa是要根据你的方法验证得出来的,开始我们用Agilent6430可以做到0.1ppb,现在转到Agilent6460可以做到0.02ppb,同时我们也会用到API5500,但是由于API5500柱后需要很长的管路,所以灵敏度会比6460差一点。
7.基质加标进行方法验证是可以同时考虑到基质效应的,其它的我们不会推荐的。
PS:如果你用API5000或者API5500做Clenbuterol的时候,由于辅助定性离子259.0这个Transition有很大的背景干扰,所以推荐你选择其它的辅助定性离子,这样API5500的灵敏度会比6460高的。