液相检测 两个保留时间相近的峰分离不开？

梯度方法与谱图

主要是原料峰与一杂质峰分离不开或出现位置互换现象,因生产中是根据分析结果来控制原料含量,因此出现这种情况会无法指导生产或误导生产,请各位高手帮帮忙,谢谢!

用乙腈;水=10:90冲洗2小时的目的是将柱子中的盐清洗干净

方法如下:
4.1色谱条件：
流动相：A相：100ml 水+900ml 乙腈+1.5g TBAHS
B相：900ml 水+100ml 乙腈+1.5g TBAHS
梯度程序：
时间(min) PUMP 值(%)
0.01 B 80
10 B 60
18 B 40
18.01 B 10
25 B 10
25.01 B 80
30 controller stop
流 量：1.0 ml/min
波 长：254nm
柱 温：40℃
4.2 样品测试
4.2.1样品处理：称取0.08克样品于50ml容量瓶，加入5ml乙腈溶解样品后用蒸馏水定容至刻度，用0.45µm滤膜过滤分析。
4.2.2用微量进样器抽取样液约5µl(建议量)注入色谱仪进行分析，待各组份的色谱峰全部流出后，利用面积归一化法进行定量.