诡异的基线和自动进样，问题出在哪里？

个人的一点小想法：我也用液相做过血药浓度的测定，也出现过基线上漂的现象：当时分析有两个原因，第一是我用的色谱柱已经是以前用的好多次的色谱柱了，又加上做生物样品本身就容易污染色谱柱，所以经常出现基线上漂，所以出现漂移以后我往往要平衡一会再进下一针；第二是液液萃取提取样品要比沉淀蛋白脏得多，尽量不要吸上蛋白，我做的时候，辛亏有预柱，实在是脏，即使离心好几次，每天做完实验后，擦洗预柱上面都比较脏。另外您的流动相里有缓冲盐又有碱，还有pH的调试，是不是和流动相也有一些关系呢，本身流动相复杂就不容易稳定，走那么多样品，难免会出现一些浓度上的变化，建议是不是尽量走完一些样品就用新配的流动相呢，虽然可能会有些对连续性上的影响。还有就是做完一组样品，我建议最好马上冲洗整个色谱系统，要不然可能对柱子和仪器都不好。我以前有个朋友也是像您这样做完整个方法学冲洗完系统再做样品，好像也出现了一些问题，但是具体的情况记不太清楚了，我觉得还是有些影响的。

应该还是系统平衡的问题。你尝试一下每次进样用梯度洗脱，每次进完样品以后平衡久一点，另外，前两个不出峰飘的问题如果反复出现的话 有可能是之前没冲出来的物质，另外，每次正式进样前，第一针样品 或者标样多进几针，运行几个循环方便系统稳定。

sssshine的解答我认为还不错，楼主可以仔细品味下。而且做这么复杂的样品，做完后用水冲洗不太好，样品杂质在柱子里面冲洗不出来，我认为后面的一系列问题都是柱子的问题

你样品最后离心就装样品管里了，是否应该用滤膜过滤一下啊？你的流动性是否过滤过呢？

进来学习，楼上的版友观点经验都很精彩，谢谢分享

血浆样品沉淀蛋白的方法有不少，比如用乙腈？

个人觉得有几种可能：

1、样品积累
楼主都是做了几十个样品才上漂的，所以觉得和样品累积在柱头有关系。

2、流动相
楼主的流动相里面有一个是0.1，比例太小了，楼主是添加到另外两相中还是走的三相溶剂?三相的话很少有厂家能有这个精度呢，特别是长时间运行的话

这个比例应该是配到一起的。

进几个样基线才会飘？那就是样品脏，导致柱子和检测器脏了咯，你有没有试过进一针样品，接着进一针空白，看看空白走出来的情况，或者进完样品后，立即用大比例的有机相冲，看看是不是有脏东西积在里面了，一般走比较复杂的样品，我们都会在柱子前接预柱，样品用小柱纯化一下