qingqingchenxia
第2楼2012/05/16
因为我是第一次用,也不知道该怎么弄,晚上看了一下别人的操作,也是看的是懂非懂的,那么我想请教你一下,我的实验顺序是这样子的。因为我是从黄瓜里提取我这种农药,是非极性的,我现在是溶解在甲醇里面,我是这样打算做的,C18先用甲醇活化,3倍柱床体积,流速设置为3ml/min, 然后是3倍柱床体积的水平衡,同样是这个流速,接着是上样,我不知道是一起倒进去,还是也是设置流速慢慢流进去啊?再接着是用5%甲醇+95%的水,10倍柱床体积,1mi/min冲洗(我觉得这一步是除杂),最后,用4倍柱床体积的50%甲醇+50%乙腈,1mi/min洗脱我要的目标物。我感觉冲洗是为了除杂,洗脱是为了获得我的目标物吧,但是我怎么觉得您说的是好像冲洗不是为了除杂,你的意思是杂志一直在柱子上,根本就没下来吗?还有,我想问一下,每一步都需要抽干吗?问了这么多问题,实在是麻烦你了
戈壁明珠
第4楼2012/05/17
楼主,C18小柱活化时甲醇和水是分先后加入小柱的,不是同时加进去,等水快过完时开始上样,控制流速。淋洗和洗脱的溶剂是可以的,不过具体组分和杂质谁先离开柱子要看两者的极性,谁的极性强谁就先离开小柱。非极性组分有较强的保留。
雾非雾
第7楼2012/05/21
不知道您做的是什么农药项目?
柱活化后上样时就是那么不断地加(只要柱管体积允许),设置好洗速(连滴不成线)就可以了。
您这个洗脱方法比较麻烦,您查查资料,如果乙腈上提取它没有问题还是用乙腈提取吧,把提取液上C18,用乙腈洗脱,然后浓缩除去乙腈,再进行其它的步骤就可以了。
qingqingchenxia
第9楼2012/05/21
还有哦,我做了一下实验,用的是甲醇溶解,5%的甲醇加上95%的水做淋洗,再加50%的水和50%的乙腈洗脱,发现大部分目标物都是在淋洗液里面,后来我去做了液相,好多杂质啊,我用的液相条件如下图,是梯度淋洗
| 液相色谱条件 (HPLC conditions) | ||
洗脱时间 Elution time | 流速/ Flow (mL/min) | A% | B% |
0 | 1 | 80 | 20 |
20 | 1 | 50 | 50 |
50 | 1 | 30 | 70 |
80 | 1 | 25 | 75 |
90 | 1 | 10 | 90 |
110 | 1 | 0 | 100 |
120 | 1 | 80 | 20 |