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紫外可见分光光度法定量测定问题

紫外可见分光光度计（UV）

  • 最近再做一个总多酚的含测，是显色反映，大概方法是这样的。
    待测液+福林酚试剂（显色剂）+碳酸钠溶液（缓冲，提供碱性环境），蒸馏水定容，反映一段时间。765nm下测定吸光度。
    由于要做条件的优化，所以显色剂和缓冲试剂的加入量成为考察因素。例如考察福林酚的加入量，设计5个水平（1.0ml，2.0ml。。。。5.0ml），其他的因素不变，测定吸光度那个最大。
    问题来了 那我是不是要每个水平都做一个试剂空白，还是单单用蒸馏水来做空白。
    前提是试剂空白在所测的波长下是没有吸收的。
    还有一个问题，重现性比较差，就算用标准品，几次测定的结果还是浮动很大（0.59-0.62）。用的是安捷伦的8453，02年的仪器了，别人都说重现性很好，我现在都在怀疑是不是灯的寿命到了。另外这个仪器不用走基线的，单光束。
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  • 该帖子已被版主-秋月芙蓉加2积分，加2经验;加分理由:鼓励提问
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    +关注 私聊

  • 秋月芙蓉

    第1楼2012/06/16

    一般是用蒸馏水做空白，完成标准曲线后测定样品

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  • 祥子

    第2楼2012/06/16

    那看蒸馏水时，仪器的读数是否稳定。稳定的话，那基本是样品的不稳定。

    不稳定，就换个钨灯看看。

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  • bsoul

    第3楼2012/06/17

    又试了几次，重现性已经不错了应该是操作误差，或是样品不稳定。
    操作误差是不是通过增大样品的量，改用较大容量瓶来测定来减小。现在用的10ml的，也没有移液器，都是用移液管的，是不是改换成50ml的容量瓶更合适一点。

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  • lilylau

    第4楼2012/06/29

    学习下，LZ情况有展进吗

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