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HPLC图谱中出现鼓包

液相色谱(LC)

  • 最近在做一化合物的HPLC,出现了以下的现象,百思不得其解,望能有高手指点。



    1)化合物为盐酸盐,当流动相为水-0.1%甲酸-乙腈系统时,HPLC图谱中出现两个峰,且两峰比例在刚配完样进样分析时约为15:85,之后一直稳定在25:75。为什么会出现两个色谱峰呢?



    2)同一化合物,当流动相为醋酸铵溶液(0.1%三乙胺,pH=6.2-乙腈时,HPLC图谱如下,出现一个鼓起来的峰,对应空白溶剂中没有该峰,这个鼓包该如何解释呢?可能是由什么引起的呢?




    希望大家帮忙对以上两个现象进行分析讨论指点,万分感谢啊!!!
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  • 有水有渝

    第1楼2012/06/26

    应助达人

    检测波长是多少,分析的是纯品还是其它样品?首先可以确定组分在你的前处理过程和两种流动相中是稳定的吗,均是等度洗脱吗,感觉上是流动相没有选择正确,可能受PH影响比较大,再调试一下,由于不知道组分的理化性质,难以提出什么建议。

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  • sssshine

    第2楼2012/06/26

    感觉还是流动相的问题!

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  • pandora98

    第3楼2012/06/26

    1.样品中含两个组分,其中一个组分极性很大,在酸性流动相中以离子形式存在,没有保留。所以图1中在死体积位置出峰。
    2.在醋酸氨溶液中,极性很大的组分依然保留较差,在死体积之后紧跟着系统峰,但是因为溶剂效应,该物质表现为一个鼓包带一个小峰。尝试用大比例的水稀释样品可以解决这个问题。

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  • kevinlee0121

    第4楼2012/06/26

    如果别的所有条件都固定不变的话,感觉很有可能是流动相的原因,比如添加剂的因素;当然也不能排除样品中成分,毕竟不同的添加剂还是有不同的效果的。

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  • liboygg

    第5楼2012/06/27

    我想知道楼主用的是什么色谱柱,楼主柱子的固定相和样品存在较强的保留,同时这种保留受流动相极性的影响很大。

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  • houjjun

    第6楼2012/06/27

    可能是流动相的问题,检测一下PH值对不对

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  • hu446273027

    第7楼2012/06/27

    是手动进样还是自动进样

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  • hmhcpu

    第8楼2012/06/27

    检测波长是210nm,样品是纯品。现在我们分析到,样品在酸性条件下,存在一个化学平衡的现象,所以会出现两个色谱峰,因此我们准备放弃酸性的流动相体系。我们又尝试了不同pH的流动相体系,结果是这样的:pH=4时,结果与甲酸的图谱类似;pH=5和7时,都有鼓包,且pH=7时的鼓包形状与pH=6.2时一致,与pH=5时不一致(因图谱上传不上去,我只能文字描述)。希望指教,谢谢!

    有水有渝(xky0230699) 发表:检测波长是多少,分析的是纯品还是其它样品?首先可以确定组分在你的前处理过程和两种流动相中是稳定的吗,均是等度洗脱吗,感觉上是流动相没有选择正确,可能受PH影响比较大,再调试一下,由于不知道组分的理化性质,难以提出什么建议。

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  • hmhcpu

    第9楼2012/06/27

    自动的

    hu446273027(hu446273027) 发表:是手动进样还是自动进样

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  • hmhcpu

    第10楼2012/06/27

    Waters Symmetry C18(4.6*250mm,5um)

    liboygg(liboygg) 发表:我想知道楼主用的是什么色谱柱,楼主柱子的固定相和样品存在较强的保留,同时这种保留受流动相极性的影响很大。

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