蛋白质单晶培养的15种方法

省部重点实验室

2012/10/13

私聊

生命科学仪器综合讨论

1）大量养晶法（bulk crystallization）：若急着养出单晶，则将纯化之蛋白质溶液加入固体盐类或饱和盐液，直到溶液中出现乳白混浊色，离心后把上清液（suppernatant）放置数天至数周，有可能养出单晶。

（2）批次养晶法（batch method）:若发现加入蛋白质的沉淀剂和盐类等化学药品，在浓度c1产生沉淀，浓度cn为液体，则在c1至cn之间细分成一串浓度c1>c2>c3>….>ci>cn，（n-2）个小试管进行养晶，可能结出单晶。此法之主要缺点在于蛋白质的消耗量大。

（3）大量透析法（bulk dialysis）：把蛋白质溶液包在半透膜（membrane）内，浸入盛有化学药品的器皿中，半透膜能让小分子进出，却不会让蛋白质等大分子通过，则器皿中沉淀剂、盐类和有机溶液等化学药品会穿过半透膜，与蛋白质起作用，直到膜之内外的浓度梯度（concentration gradient）降到零为止。此法的好处在于，器皿中化学药品之浓度可作连续之调整，ph值的范围也可探讨。坏处是膜之内外浓度差异减少时，平衡速率也随之降低。

（4）微量透析法（microdialysis）:把半透膜的体积缩小，绑在比钮扣略大的衬架上，架体之凹槽内注入蛋白质溶液，包覆半透膜的体架放入盛有化学药品的器皿，其养晶原理与大量透析法相同，只是使用蛋白质和化学药品的量放得少。注意凹槽内不得留有气泡，否则膜外的化学药品为气泡所阻止而无法透过气泡，渗入膜内的蛋白质溶液。