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学习如何使用凝胶色谱柱

凝胶色谱（GPC）

  • 拿到新的柱子如何使用，很多朋友一直疑惑。其实我们买来新的柱子，都会有说明书和一张柱效报告，以agilent 的为例，他的一根柱子都是用THF做流动相，进样0.5ul的BHT，流速为1.0ml/min，检测器为紫外254nm，给出的柱子性能有：plates(1/2 height, 5 sigma)，symmetry(@10%), RT, width(1/2 height, 5sigma) 这和试剂的VOC类似。

    再就是柱子的data sheet。 这很重要，首先给出了柱子的口径，不同仪器管路的接口是不一样的，连接agilent的柱子的管路接头应该是0.099in。螺母的螺纹头长0.21in。使用1/16in的外径和内经为0.010in或者0.007in这样的管路才能有效减小死体积到最小。，柱子连接时能用扳手的地方是柱子的两端，而不能扭中间。

    eluent 的流速根据不同的柱子可以使用的流速也是有限制的，也有推荐的经典的流速。一般而言是内经越小的流速就要选择越小，4.6mm id的柱子经典流速为0.2-0.5ml/min， 而7.5mm ID的柱子流速为0.5-1.5，我们用这类柱子最多，一般都用1.0ml/min，取的中间值，也有25mm ID 的柱子，经典流速就为5.0-20ml/min了，这一般是制备柱，用得最多的流速是10ml/min。

    柱子还给出了样品的前处理和进样的要求。样品的分子量必须在柱子能分析的分子量范围之内。还是以agilent的，也就是PL的柱子为例，他给出的建议是：ID=4.6mm 的柱子 能接受的样品浓度为：0.01-0.2%， 进样量为1-20uL， 而ID=7.5mm 的柱子的浓度为：0.05-0.5%， 进样体积为：20-50uL，ID=25mm 的柱子的进样浓度：0.5-5.0%，进样体积为：500-2000uL。

    流动相也有说明，这个是很关键的。直接影响着你柱子的寿命和柱效的。

    一般PL的柱子里的流动相是甲苯，但我们可能会用THF或者其他试剂作为流动相，这里就需要切换流动相，PL将可能使用的流动相分为了4类，每类切换的方式有差别，第一类是hexane，perfluoroalkanes, dichloromethane, MEK, ethyl acetae, chloroform.这类作流动相的首先用acetone在0.5ml/min冲洗两倍柱体积，在用上面提到的新的流动相以0.5ml/min的流速冲洗2倍柱体积后，再升高到分析的流速。

    第二类的流动相是dichloromthane和cyclohexane，也是先用acetone在0.5ml/min冲洗两倍柱体积，在用这新的流动相以0.2ml/min的流速冲洗2倍柱体积后，再以每分钟1摄氏度的速度升高柱温到60摄氏度， 再将流速升到到分析时的流速。

    第三类，DMAC, Pyridine, DMF, DMSO, NMP，这类流动相需要也是先用acetone在0.5ml/min冲洗两倍柱体积，在用这新的流动相以0.2ml/min的流速冲洗2倍柱体积后，再以每分钟1摄氏度的速度升高柱温为70摄氏度， 再将流速升到使用的流速。当然，有可能你柱温不会使用到那么高的温度，但由于这类作为流动相的试剂粘度都很高，为了降低粘度，柱压，都会使用相对较高的温度。

    第四类，o-DCB, TCB, o-CP, m-Cresol，这类试剂作为流动相的使用温度相对更高，所以先将柱温升高到50摄氏度，再用新鲜的流动相拥0.1ml/min的流速冲洗2倍柱体积以上，在以每分钟1摄氏度的速率升高柱温到110-150摄氏度，达到温度后再升高流速到使用流速。
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    +关注 私聊

  • zhw19811005

    第1楼2012/12/25

    期待楼主精彩继续

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    +关注 私聊

  • histone1

    第2楼2012/12/27

    谢谢分享,基本上是把PL色谱柱说明书里的要点说全了.

    不过有一点要更正,色谱柱刚来的时候是在乙苯里,而不是甲苯.

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  • 分
  • 该帖子已被版主-小不董加2积分，加2经验;加分理由:感谢交流
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  • 小不董

    第3楼2012/12/28

    应助达人

    感谢你的订正，你能再列举些其他厂商的柱子的要求吗？看又有哪些相似或不同之处。

    虽然是说明书上的内容，但又有多少人仔细去看过， 柱子的使用也是按照说明书来操作的呢？

    histone1(histone1) 发表:谢谢分享,基本上是把PL色谱柱说明书里的要点说全了.

    不过有一点要更正,色谱柱刚来的时候是在乙苯里,而不是甲苯.

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