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[求助]新人:关于亲和色谱柱的填料的基质,该如何入门

液相色谱(LC)

  • 是进入这个领域的新人.上学的时候学的不只这个专业,现在工作开始做这方面的事情.
    具体的是手上有种抗体,想把它偶联到合适基质上,做成针对抗原的亲和柱.
    第一步是要筛选合适的基质.我想请教的是,常用的亲和柱的基质有哪些,它们的理化性质怎么样,提供什么基团,对应结合什么基团,如何激活,如何偶联,适用的操作环境(如PH值等),价格,厂家等等这些问题.
    不知道有没有这方面的工具书,或者想查阅一些科技期刊的话,哪些比较好,常用的检索关键字词是些什么,既有针对性,有比较全面的找到需要的资料.
    谢谢.
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  • tianru的爸爸

    第1楼2006/07/06

    你的问题比较多,是一个关于亲和色谱的基本内容。

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  • tianru的爸爸

    第2楼2006/07/06

    亲和色谱的基本原理
    亲和色谱(affinity chromatography)与其它类型的色谱技术有所不同,它是在一种特制的具有专一性吸附能力的吸附剂上进行的色谱。
    利用亲和色谱技术分离某一生物分子时,首先必须寻找能够被该分子识别和可逆结合的生物专一性物质,此物质称为配基(ligand)(如酶、辅酶、抗体、激素等)。其次要把该配基以共价键结合到色谱介质(不溶性固体基质,也就是固定相)上,此色谱介质称为载体(carrier)。最后把固定化配基充填在色谱柱内做亲和柱,使要分离的混合物流经该亲和柱,混合物中只有能与配基专一性结合形成络合物的分子被吸附,不能被结合的杂质则直接流出,通过更换洗脱液的方法,促使被吸附物从配基上解吸下柱,从而获得亲合物。亲和色谱主要用于蛋白质和生物活性物质的分离与制备。

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  • tianru的爸爸

    第3楼2006/07/06

    亲和色谱的载体
    载体在亲和色谱中的作用是使配基固定化,提供亲和物质和配基之间特异性结合的空间环境,常称为固定相。用作亲和色谱的载体应具有以下特性:
    1、载体应该是惰性的,尽量减少物理吸附和离子交换等非专一性吸附;
    2、载体上必须有足够数量的可活化的化学基团,这些可活化的基团应能在较温和的条件下与大量配基偶联;
    3、具有多孔的立体网状结构;
    4、具有较好的物理和化学稳定性;
    5、具有良好的机械性能,并且颗粒均匀。
    常用的载体有:琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、多孔玻璃珠等。

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  • tianru的爸爸

    第4楼2006/07/06

    应用实例:2-胰凝乳蛋白酶的提纯
    1、亲和吸附剂(Σ-氨基-N-乙酰-D-色氨酸)的制备:取一定体积的Sepharose4B,加入100mgCNBr。搅拌混合物,滴加2-8mol/L NaOH,使溶液pH维持在11.0。在20℃左右,8-12分钟完成反应。在布氏漏斗中抽滤活化的琼脂糖,然后用20倍体积冷的0.1mol/L NaHCO3(pH9.0)溶液洗涤。将上述活化的Sepharose4B与等体积0.1mol/L NaHCO3(pH9.0并在冰箱中预冷)溶液混合,接着迅速加入α-胰蛋白酶抑制剂(Σ-氨基-N-乙酰-色氨酸甲酯)。抑制剂的最大用量为每毫升Sepharose 4B 65μmol/L。4℃缓慢搅拌约24小时,而后再用水和缓冲液反复地洗至没有游离的抑制剂为止。制得的亲和吸附剂在50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.0)中保存备用。
    2、分离:亲和吸附剂装柱后用50mmol/L Tris-HCl(pH8.0)缓冲液平衡(室温)。样品溶于同样缓冲液中并上柱,再应用同样缓冲液淋洗柱子。流速为30-60ml/小时,直至280nm无光吸收时停止洗涤,然后改用0.2mol/L醋酸缓冲液(pH3.0)洗脱。
    再上传一个别人的文献。
    免疫亲和层析法纯化重组人促红细胞生成素的实验研究

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  • myjob

    第5楼2006/07/06

    谢谢"跑来跑去"老兄的指教
    常用的载体有:琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、多孔玻璃珠等。
    就想问,这几种载体的一些基本情况,如首帖所说.不知道有没有比较全面,权威的工具书,或者说如果想在网上查,该如何入手?

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  • tianru的爸爸

    第6楼2006/07/14

    给你一个网站连接:http://www.chromatography.amershambiosciences.com/aptrix/upp01077.nsf/Content/Products?OpenDocument&parentid=549&zone=Labsep

    myjob 发表:谢谢"跑来跑去"老兄的指教
    常用的载体有:琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、多孔玻璃珠等。
    就想问,这几种载体的一些基本情况,如首帖所说.不知道有没有比较全面,权威的工具书,或者说如果想在网上查,该如何入手?

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