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缓冲盐做流动相,柱压变高,进样后基线上移成宽峰?

液相色谱(LC)

  • 本人用磷酸盐缓冲盐做流动相,做了一周多的实验,之前一直没事,每次做完实验都用20%的甲醇水冲柱子1小时,再用甲醇冲柱子1小时,可是这次做实验,发现柱压变高,待柱压平稳,基线平稳后,进样,基线就上移,形成大宽峰,样品中的峰都骑在大宽峰上出峰,保留时间没什么变化。

    后停机冲柱子,先用20%甲醇水冲,流速1ml/L,柱压直线上升,到200多了,请问这是为什么?是柱子堵了?还是缓冲盐析出了?还是泵堵了?泵有自清洗功能,每20Min用10%异丙醇冲0.5min,请问这是否合理?求高手啊!!先谢谢大家了,本人比较着急~~渴望大家的帮助及意见。请随意讨论。
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  • cminzhen

    第1楼2013/08/25

    流动相有没有重配?使用前是否过滤?

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  • chen2351

    第2楼2013/08/25

    流动相是隔夜的,用之前都过滤了,可是以前用隔夜两三天都没事,这次只是隔夜一天就有事了呢?

    cminzhen(cminzhen) 发表:流动相有没有重配?使用前是否过滤?

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  • 小不董

    第3楼2013/08/25

    应助达人

    增大纯水的比率,小流量冲洗下。看是否会好。

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  • cminzhen

    第4楼2013/08/25

    同一个流动相保留时间有变化么?有大变化的话还是重新配吧

    chen2351(chen2351) 发表:流动相是隔夜的,用之前都过滤了,可是以前用隔夜两三天都没事,这次只是隔夜一天就有事了呢?

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  • d475643196

    第5楼2013/08/26

    1、缓冲盐流动相最好要新配的
    2、冲洗时水相最好高些,一般是95%水,有一些柱子是能够用纯水冲洗的直接用纯水冲洗,例如Ecosil-EPS、Ecosil-AQ和waters的Xbridge BEH Shield RP18等
    3、冲洗时间至少2小时,为了保证柱子能够尽可能的达到最大寿命。
    4、排除样品或其杂质的吸附,冲洗时可能用的比例就要不同了。

    以上意见仅供参考,如果楼主还有问题的话可以PM我。谢谢。

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  • zhoujin83

    第6楼2013/08/26

    感觉最好不要用95%的水冲洗柱子,这样对柱子不太好。因为甲醇粘度高会造成柱压高,感觉不如用10%乙腈或20%乙腈冲洗柱子。
    楼主是不是最好检查下你的冲洗柱子的方法,我们以前有一次不知道谁把这个方法改动了,导致冲柱子用的是缓冲盐,结果可想而知。
    柱子堵了,可以用低流速多冲一会,实在不行就0.2或0.1流速倒冲,现在的柱子可以耐受倒冲的,我以前有一根柱子每过一个月就需要倒冲一次,这样半年了也没事。

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  • 小虾米

    第7楼2013/08/27

    我也觉得不好,虽然有很多厂家说可以达到95%以上水(甚至100%)冲洗,我觉得还是在90%以下清洗会更好些。

    zhoujin83(zhoujin83) 发表:感觉最好不要用95%的水冲洗柱子,这样对柱子不太好。因为甲醇粘度高会造成柱压高,感觉不如用10%乙腈或20%乙腈冲洗柱子。
    楼主是不是最好检查下你的冲洗柱子的方法,我们以前有一次不知道谁把这个方法改动了,导致冲柱子用的是缓冲盐,结果可想而知。

    柱子堵了,可以用低流速多冲一会,实在不行就0.2或0.1流速倒冲,现在的柱子可以耐受倒冲的,我以前有一根柱子每过一个月就需要倒冲一次,这样半年了也没事。

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  • 三人行

    第8楼2013/08/28

    如果有缓冲盐析出,色谱柱柱头填料可能需要更换。

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