HPLC法测定生脉注射液中Rg1和Re的含量

wangshirf

2013/08/31
x射线仪器

私聊

液相色谱（LC）

高效液相色谱法同时测定生脉饮中人参皂苷Rg1和Re的含量

摘要：目的建立人参皂苷Rg1和Re的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱：Kromasil C₁₈柱（4.6mm×150mm，5µm）；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液（21：79）；流速1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：203nm。结果：对生脉饮中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re进行含量测定。0.050～1.000 mg·mL (r=0．9996)和0.050 1.000 mg．mL (r=0．9995)，平均回收率分别为98．2％(RSD=1.8％)和98．5％(RSD=2．2％)结论该方法操作简便，结果可靠，可用于中药注射液生脉饮中Rg1和Re的含量测定。

生脉饮由红参100 g、麦冬200 g、五味子100 g组成,具有益气养阴，复脉固脱之作用。用于气阴两亏，脉虚欲脱的心悸、气短，四肢厥冷、汗出、脉欲绝及心肌梗塞、心源性休克、感染性休克等具有上述证候者。如能对生脉饮中的人参皂苷进行同时测定，将有助于更好地全面评价产品的质量。本文提出了用HPLC同时测定人参皂苷Rb 、人参皂苷Rg。成分含量的方法。

[关键词] HPLC；生脉饮；人参皂苷Re ；人参皂苷Rg1

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-20AT高效液相色谱仪，SPD-M20A检测器， LCsolution色谱工作站， Metteler AB265S（0.01mg）；Sartorius BS124S（0.1mg）)，必能信超声波清洗器(必能信超声有限公司)

1.2 试药 人参皂苷Re、人参皂苷Rg1对照品(均购自中国药品生物制品检定所)，乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，其它试剂均为国产分析纯，蒸馏水自制。
2 实验方法与结果

2.1 色谱条件与图谱

色谱柱: Kromasil C₁₈柱（4.6mmx150mm，5um）；检测波长：203nm；流速：1.0ml.min^-1；流动相：乙腈-0.05%磷酸酸（21：79）；柱温：30℃。

2.2 溶液制备

2.2.1对照品溶液

取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml 分别含0.10mg和0.02mg 的混合溶液，即得。
2.2.2供试品溶液

精密量取本品2ml，蒸至近干，加流动相使溶解，并转移至2ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 线性关系考察
精密量取各对照品溶液，制得5个系列不同浓度的对照品溶液，各取10依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品峰面积Y为纵坐标，浓度X(mg·mL )为横坐标，绘制标准曲线，结果表明人参皂苷Rg 在0．050～1．000 mg·mL 范围内线性关系良好，回归方程为：Y=96.492X一2．6392，r=0．9996(rt=5)，人参皂苷Rh 在0．050～1．000 mg·mL 范围内线性关系良好，回归方程为：Y=20.01X+2.1457，r=0.9995(n=5)。
2.4精密度试验

精密吸取同一供试品溶液，重复进样6次，计算人参皂苷Rg1 和人参皂苷Re 峰面积的RSD分别为1．5％和1．4％。
2.5 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，分别于0，2，4，8，16，24 h测定，结果表明：人参皂苷Re和人参皂苷Rg1。在24 h内稳定，RSD分别为1．3％和2.2％。
2.6 重复性实验 精密量取同一批次的生脉饮平行6份，在上述色谱条件下分别进行HPLC分析，计算人参皂苷Rg1和人参皂苷Re峰面积的RSD分别为1．8％和2．0％。

2.7 回收试验

取同一批生脉饮，约取1ml6份，精密称定，按上述色谱条件进样测定，用回归方程计算回收率。2.8 样品含量测定

精密量取3个批号的生脉饮，配制成供试品溶液，在上述色谱条件下进行测定，计算样品中人参皂苷Re和Rg1的含量，结果见表。

表1 样品分析结果

编号含量Rg1和Re/（ug/ml）

1 98 / 56

2 89 /60

3 94 / 64

图1 人参皂苷Rg的HPLC图

图3 样品的HPLC图

3 讨论

3.1 流动相的选择

实验中曾采用甲醇一水、甲醇一磷酸作为流动相，结果发现无法使人参皂苷达到基线分离。改用乙腈一磷酸水水体系后，人参皂苷Re和Rg1，能基本达到较好分离。以上方法学指标显示其它杂质的干扰对人参皂苷Re和Rg1测定结果影响很小。

3.2 检测波长的确定

分别取适量的人参皂苷Rb．和Rg。对照品，用甲醇溶解配成溶液，采用二极管阵列检测器考察不同吸收波长图谱，重点考察203 nm、220 nm、230nm、254nm处的谱图特征，结果表明，203nm处的谱图特征性强，因此选择203 nm为检测波长。