[求助]:用串联质谱测定尿中的代谢物含量

串联质谱定量时,是以后面产生的碎片峰（子离子）定量,但是这一子离子是由母离子在碰撞室产生的特征性碎片，所以用MRM定量灵敏度会比用SIM定量好很多。

建立方法的步骤是：用一定溶度的标准品溶液（1-10 ug/mL）Tune化合物的一级质谱条件，找到母离子的最佳质谱条件，然后对母离子进行打碎，优化碰撞能量，得到其特征性的子离子。最后利用该质谱条件和该母离子->子离子对进行定量。

对了你用的是哪个厂家的仪器，说一说，方便其他人和你一起探讨。

Good luck!

非常感谢, 一下子豁然开朗,我要用的是VARIANS LCMSMS.
还有一个问题想请教,你说的子离子定量,我的内标是D代物,打碎后,其特征离子与被测物相同,不会有影响吗?还有我若想用更多的碎片验证该化合物,为此灵敏度就要下降,还是不会下降很多.

你既然用D代物作内标，最好选择一个子离子也和待测物子离子分子量不一样的做定量，否则可能有干扰，因为两者在色谱上一般不分离，而质谱检测器可能会有记忆效应，建议换个结构类似物当内标，或者找一下分子量不同的子离子。

至于你想用更多的碎片验证该化合物,灵敏度肯定要下降。建议定性和定量的实验分开做。

Good luck!

谢谢,可是文献上报道都是用的D代内标,而且这两主要碎片峰都一样.你说的接近的两峰质核比一样,若没完全分开,我知道在单四极杆中定量是不可能的.若是在三级质朴中会不会有点不同? 若还是影响,主要是在线性还是什么别的方面?
还有这个问题一般公司的软件设置,会不会有所处理呢,象DECONVERLUTION啥的?

没错一般文献报道都使用D代内标,但他们选择的子离子一般不一样，就你的情况而言如果化合物和D代内标的子离子也一样，我分析两个的检测会互相干扰，比如你只加化合物而不加氘代内标时，氘代内标也出峰，反之亦有可能，建议你先试试，如果没有这种影响，就最好不过拉！
如有问题，想从软件上入手建议改改扫描时间间隔。
Good luck!

版主啊, 我已经试过只加内标和只加化合物的情况,似二者没有干扰,很幸运.现在在做灵敏度时又碰到点问题,我原来扫描时间是0.4,改为0.3后峰形更难看了,更趴了,这二级质朴在这方面改变会改善一些吗?一般设为啥值呢,扫描间隔多少为最佳.还有一个TUNE的问题,做之前最好是用该化合物TUNE一下是吧.我看别的公司是用一个三通接上LC,MS,和DIFUSSION PUMP,这个是切换阀进一次样TUNE一下还是怎么回事?不明白啊.不知道VARIANS的仪器哪个咋操作.
还有因为我是先用的仪器上现成的MRM方法,想改一下,先全扫描后选择碎片扫,和先母离子扫后碎片离子全扫,结果楞是不出峰了,不知道是啥原因啊.

另外说一下VARIANSLC-MS-MS, 说明书很不详细和清楚,没有象其他公司专门的TUNE界面,改变参数时可很清楚显示离子流的变化,雾化气和干燥气气流压力无法手调.也许是我还不熟的原因,但是觉的不是很好用.

多谢版主和这个版.

你一下子又提了很多问题，呵呵！
1、既然化合物和D代内标没有互相干扰，那你很幸运，就用D代内标好了。
2、扫描时间一般设置是0.2s，这和你化合的峰宽有关，一般一个色谱峰需要保证有至少13个数据采集点。
3、关于Tune一般有两种做法：
做法一、用一个三通接上LC,MS,和syringe pump, LC设置相应流速（实际上样品的流速及有机相比例，一般用50％有机相，0.2mL/min (ESI),0.8mL/min (APCI）)，syringe pump 注射化合物溶液，一般1-10ug/mL,5-10uL/min,优化各个参数。一般采用该方法。
做法二、切换阀进一次样TUNE一下（flow injection),等你经验丰富了，建议你用该方法，优点：因采用较低浓度样品，基线较低。

4、看了你的描述，我还是不太清楚。作MRM只要你选对母离子和子离子，给予最佳打碎能量，应该没什么问题。

Varian的仪器没用过，他们没有安装培训吗？
建议打电话给他们。

Have a good day!

哇,这么快就有答案了.多谢啊.
我是想说MRM出峰还可,换了FULL SCAN--SIR就不出峰了,不知哪出毛病了,我只是改了扫描范围呀,还要变别的吗?
还有用的是别人设好的方法,定量离子一个,定性离子两个,我把定性离子删除后,做定量离子扫描,荑,不出啥峰了?怪,难道除了这个还要改别的吗?
还有TUNE,这VARIANS没有单独的TUNE界面, 我找不到它的手动TUNE,AUTOTUNE可用吗,可是这可是和CALIBRATION一起操作,这会影响别的吗?
谢谢.

很抱歉，最近比较忙，没来得及给你回复，你的问题解决了没？