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一次成功的MDCK细胞传代

  • 会师楼
    2013/12/30
    药物分析
    • 私聊

食品毒素/微生物检测

  • 一次成功的MDCK细胞传代

    1.D-MEM培养液的准备

    500mlD-MEM液中加入：青、链霉素5ml，HEPES缓冲液12.5ml。7.5%牛血清白蛋白组分V 12.5ml

    2.细胞生长液的准备

    胎牛血清10ml加到90ml的上述1的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。



    原始胎牛血清 分装的胎牛血清

    3.首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5ml在37摄氏度水浴中预热的EDTA-胰酶。

    4.温和地摇动细胞瓶1分钟，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA-胰酶。

    5.重新加入5ml在37摄氏度水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。



    同事在操作，我照相。

    6.加入1mlEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37摄氏度孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5-10分钟）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1ml胎牛血清灭活残余的胰酶。



    还是同事操作，我照相。

    7.加9ml已经配置好的含有L-谷氨酰胺的D-MEM培养液，轻轻用移液管来吹散细胞团。

    8.取10ml混合物加到90ml细胞生长液。

    9.细胞培养板没孔加入大概5ml上述混合液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常5ml细胞悬液2-3日可生长成片的单层细胞。



    细胞培养板加入细胞悬液

    10.于37摄氏度，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。



    CO2培养箱



    成片的细胞。
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  • 会师楼

    第1楼2013/12/30

    为什么我在后面传上去的一张照片看不见。

0
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  • 翠湖园

    第2楼2013/12/31

    会不会是照片格式问题？

    会师楼(hjx1988) 发表:为什么我在后面传上去的一张照片看不见。

0
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  • 会师楼

    第3楼2013/12/31

    呵呵呵，上来了，估计当时是修改的没那么快上来。

0
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  • zyl3367898

    第4楼2013/12/31

    应助达人

    结果是什么？

0
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  • 会师楼

    第5楼2014/01/01

    长成成片的细胞啊。

0
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  • wulin321

    第6楼2014/01/03

    应助达人

    有个小结就更好了

0
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  • 会师楼

    第7楼2014/01/03

    对头，这下说道电子上了，呵呵，多谢指点

0
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