色谱峰出现分叉如何解释？（样品中含有缓冲盐）

主峰的保留时间太靠前，可能主成分峰和杂质峰无法完全分离，建议将主峰保留时间调至10分钟左右再看色谱图。

楼主用的检测波长？缓冲盐？保留时间这么靠前很有可能是缓冲盐的峰

样品在次ph下不稳定分解了？

三分钟就出峰，这样不好吧，至少要控制一下保留时间

检查一下样品性质吧。楼主的样品估计是弱酸性，而且其pKa应该为6左右。所以之前楼主的稀释剂pH=4，样品完全不电离，同时流动相因为没有缓冲盐，所以pH变化不大，样品进入流动相后仍然呈分子状态，就能得到一个很好的峰；而将稀释剂pH调到6后，样品在这个pH下有两种状态，即分子态和离子态，并将这种状态保持到流动相中，所以出现了这样的峰形。另外，由于楼主的样品是弱酸性的，其保留随流动相pH的变化情况是，流动相pH增大，保留减小，流动相pH减小，保留增大。如上所述，楼主的流动相没有缓冲能力，稀释剂pH增大后，流动相pH也相应增大，所以样品保留减小了。

谢谢的zhoujin83分析，样品性质确实如你所述，低pH值为分子态，升高pH值会逐渐向离子态变化。

再继续请教，我在升高pH值该如何进行HPLC方法条件的设置使之只出一个峰？或者在计算这种物质的峰面积时我能够把两个峰面积值加一下？谢谢！

280nm、磷酸盐缓冲液

样品在pH升高时会又分子态向离子态过渡

样品纯度较高，所以就提前出峰了，不知这样做是否妥当？