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保卫舌尖上的安全专题之三──畜产品兽药残留快速检测之试剂盒质量评估
qzxmsy
2014/04/15
私聊
兽药/抗生素检测
保卫舌尖上的安全专题之三──畜产品兽药残留快速检测之试剂盒质量评估
目前兽药残留酶联免疫试剂盒品种和生产厂家很多,质量良莠不齐,如何评估试剂盒质量成为基层实验室,尤其是基层检测人员亟待解决的难题之一。现结合农业部有关技术规范,以及本人多年来的工作实践,谈一点粗浅的体会。如有不当之处,请各位同仁批评指正。
农业部《兽药残留试验技术规范(试行)》(农牧发[2003]1号)规定:
兽药残留检测方法的精密度(变异系数)、回收率和最低检测限的要求如下;
1.精密度
精密度以变异系数(CV%)表示,所采用的检测方法应符合残留检测方法精密度的要求,根据待测物浓度不同,其精密度要求如下:
待测物浓度μg/kg 批内变异系数(CV%) 批间变异系数(CV%)
100000 1.5 2.3
10000 7 11
1000 11 16
100 17 26
10 21 32
1 30 45
0.1 43 64
2.回收率
用添加法测定回收率,至少选定3个添加浓度,一般最低检测限(或2倍)为必选的浓度。每一浓度5个样,进行不少于4次重复试验。
不同添加浓度的回收率原则要求如下:
添加浓度m(μg/kg) 回收率(%)
p≥100 80~110
100>p≥10 70~110
10>p≥1 60~120
p≤1 50~120
3.灵敏度
灵敏度以最低检测限(mg/kg或μg/kg)表示。检测方法的灵敏度必须低于或等于相应的最高残留限量,其相关数值如下:
最高残留限量μg/kg 1 10 20 50 100 200
灵敏度μg/kg 1 5 10 20 20 40
最高残留限量μg/kg 500 1000 2000 5000 10000
灵敏度μg/kg 100 100 200 200 500
注:如最高限量≤50μg/kg时,则灵敏度可低于或等于最高残留限量。
另外,在评估试剂盒质量时,还需考虑以下因素:
4.IC50平均值:英文half maximal (50%) inhibitory concentration (IC) of a substance (50% IC, or IC50),我国一般称为半抑制浓度(或半抑制率),缩写IC50。在竞争ELISA标准曲线中这是一个非常重要的数据。在竞争ELISA中,不添加抑制物的对照孔的OD值为B0,添加了抑制物的OD值为B,B/B0%就是结合率,在结合率为50%时所对应的抑制物的浓度就是IC50。一般IC50的数值越小,说明抗体的特异性能越强!
5.特异性:与类似物质的反应程度越小越好。
6.实际检测效果:评估上述指标一般均采用标准品或基质较纯净的样品,效果自然较好。在实际检测过程中,样品的基质差异很大,有的偏酸,有的偏碱,有的带有细胞、脓液,有的含有其它兽药代谢产物。因此在评估一个兽药残留酶联免疫试剂盒时,还应该用已经其它仪器方法(如GC-MS、
LC-MS
)确认阳性的样品,进行反复检测,评估试剂盒对实际样品的检测能力。
以克伦特罗为例,目前农业部规定酶联免疫法检出限为1μg/kg,所以考核酶联免疫试剂盒的指标应该是:
满足要求 性能优秀
1.批内变异系数 ≤30% ≤10%
2.批间变异系数 ≤45% ≤15%
3.回收率: 60%~120% 80%~110%
4.灵敏度: ≤1μg/kg ≤0.5μg/kg
5.IC50 (0.5~1)μg/kg ≤0.5μg/kg
在基层实验室,一般可只做批内变异系数、回收率、灵敏度和IC50,批间变异系数和特异性可核对说明书相关内容。
下面给出一个实验室内部评估时的样品排列图,供参考:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A B0 B4 S12 S14 S21 S23 S25 S32 S34
B B0 B4 S12 S14 S21 S23 S25 S32 S34
C B1 B5 S12 S14 S21 S23 S25 S32 S34
D B1 B5 S12 S14 S21 S23 S25 S32 S34
E B2 S11 S13 S15 S22 S24 S31 S33 S35
F B2 S11 S13 S15 S22 S24 S31 S33 S35
G B3 S11 S13 S15 S22 S24 S31 S33 S35
H B3 S11 S13 S15 S22 S24 S31 S33 S35
S11代表第一个添加浓度的第1份样品,S12代表第一个添加浓度的第2份样品,依此类推。
添加浓度:按农业部规定至少选定3个添加浓度,而克伦特罗的检出限为1μg/kg,所以添加浓度1μg/kg为必选,其余2个添加浓度可选择0.5μg/kg和2μg/kg。
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私聊
xndxlzm
第1楼
2014/04/19
应助达人
挺不错的········
0
发表回复
+关注
私聊
被风吹过的夏天
第2楼
2014/05/23
应助达人
如果有仪器的比对试验会更完美
0
发表回复
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