有两个峰挨得很近 一直分不开

我看这分离度已经可以了，莫非楼主需要做制备，所以需要更大的分离度？
如果是我，我不太会再降低流动相有机相比例了，因为现在的保留已经非常强了。我可能会试试乙腈体系，因为不同的溶剂的选择性不同，使用乙腈可能会增加分离度，但是估计效果不会很好。我也可能会使用其他色谱柱，也有可能会增加分离度。
另外，更换流动相的水相，有可能会有意想不到的惊喜。因为如果前面那个物质是酸性或碱性物质的话，改变了流动相的pH，会大大增大或减小保留。

多谢楼上的回复 我现在就是想把前边的那个峰给制备出来 然后打谱确定其结构 就是因为分不开 所以一直没办法

我的确也使用过乙腈 效果跟甲醇比起来没有什么改进 也许我可以改变pH试试 pH是不是要不断地试试

都到了这个时间出峰，看样子分离度要想改进估计够呛

试试质谱鉴定，不需要完全分离
如果你可以用到LC-NMR的话，做NMR都不需要分离

极性比较接近很难分离。

你这个已经基线分离了，如果50分钟依然分不开的话，那你可能要考虑30%~40%的甲醇，然后换成1cm或者2cm的制备柱，提高流速，时间会比较长，不过做制备就是得有耐心

两个峰的面积比例这么接近，可能是异构体哦。打个MS和核磁先分析下，真要是异构体恐怕得用手性柱分了，高手通过核磁也许能解出来。