高效液相色谱串联质谱测定武夷岩茶中
草甘膦残留量的方法探讨
摘要：采用高效液相色谱串联质谱建立了武夷岩茶样品中草甘膦的残留量的测定方法。样品经水固相萃取和茶叶专用萃取柱（TPT）净化后，在硼酸盐缓冲液中与9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC-Cl）进行衍生化反应，以1%乙酸铵溶液和乙腈为流动相，质谱检测采用电喷雾正离子化模式和多反应监测模式。结果表明，草甘膦在1ng~10ng/mL范围内线性良好，线性相关系数r=0.998。通过对空白武夷岩茶样品进行4个加标水平的添加回收实验（n=5），草甘膦的平均回收率和相对标准偏差（RSD）分别为87.3%~98.0%和（3.46~5.12）%。
关键词：液相色谱－串联质谱；草甘膦；衍生反应
草甘膦（glyphosate，GLY）属内吸传导型广谱灭生性除草剂，能有效防除禾本科阔叶杂草。草甘膦的除草原理是通过喷施草甘膦药液到杂草叶面，经叶面吸收后在光合作用下传导至根部，抑制植物蛋白的合成，使杂草叶面枯黄，根部坏死，以达到除草的目的[1]。草甘膦的用量逐年递增，目前已成为世界上应用最广、用量最大的除草剂[2]。因其具有高效低成本等特点，草甘麟被广泛应用于森林、橡胶园、田园、茶园、桑园、甘蔗、农田以及铁路、机场、仓库附近等地的除草[3]。
草甘膦作为一种毒理性较强的农药，主要以富集的方式危害人畜或生态环境，在国内外对其在食品中的残留量已有检测方法[4-7],而对其在武夷岩茶中的残留量却未见有相关的文献报道。因此，本文以武夷岩茶为研究对象，采用高效液相色谱串联质谱法对草甘膦残留量的检测方法进行了研究，以期为武夷岩茶中的草甘膦残留量检测提供参考。
1、实验部分
1.1仪器与设备
液质联用仪（美国Agilent Technologies 1200-6420型）；KQ-250B超声波清洗器；RE-25B旋转蒸发仪；THZ-98AB恒温振荡器；艾捷尔牌茶叶专用萃取柱（TPT）。
1.2 试剂与材料
草甘膦标准溶液（纯度>99%）；乙腈（色谱纯）；乙酸铵（分析纯）；衍生剂：9－芴甲基氯甲酸酯（FMOC-Cl）（分析纯），十水硼酸盐（分析纯）；纯净水；武夷岩茶样品。
1.3 样品制备
称取2 g（精确到0.001g）的武夷岩茶粉碎混匀的试样于250 mL的具塞锥形瓶中，加入20mL水，恒温振荡45 min，提取液过滤至250ml的另一具塞锥形瓶中，待用。先以5 mL纯净水自然流经茶叶专用萃取柱，再取1 mL的提取液使其自然流经小柱，流出液收集在浓缩器的梨形瓶中，再用25 mL乙腈+水（1+3）混合液淋洗小柱，流出液并入上述梨形瓶中，经旋转蒸发仪浓缩至干，用乙腈：水（1：3）溶解并定容至l mL，加入0.2 mL 5%硼酸盐水溶液，振荡后再加入0.2 ml 1g/L FMOC-Cl丙酮溶液，静置隔夜后过微孔滤膜后于液质联用仪测定。
1.4 质谱条件
1.4.1液相色谱分析条件
色谱柱：Z0RBAX Eclipse XDB-C18 (4.6×150mm, 5μm)；流动相A：1%乙酸铵水溶液，流动相B：0.1%甲酸的乙腈溶液；二元梯度洗脱程序见表1：流速：0.4ml/min；柱温：室温；进样量：30μl。
2.1检测条件的选择
通过查阅相关的文献可知草甘膦的极性较强，并具有难挥发、紫外光区无吸收等特点，为此，柱前或柱后衍生技术成为目前草甘膦残留分析的常用手段。以9－芴甲基氯甲酸酯（FMOC-Cl）为衍生试剂的衍生技术，其衍生介质与草甘膦的水提取液相容性好，过程简单，特别是衍生产物GLY-FMOC在质谱中均有良好的响应[5]。而且有关衍生物GLY-FMOC 在正负离子模式下的测定均有报道 [6,7]，但通过实验对比，在正离子模式下，GLY-FMOC有更高的响应值，而且在流动相中加入1%的甲酸溶液后，可以有效加强正离子扫描的信号值，因此本方法采用正离子模式测定。
2.2线性范围
将100μg/mL的草甘膦标准溶液用纯净水稀释，配制成质量浓度为1、2、5、7和10ng/mL的标准工作溶液，分别取1mL上述标准溶液，加入0.2mL 5%硼酸盐水溶液，振荡后再加入0.2mL 1g/L FMOC-Cl丙酮溶液，静置隔夜后上机检测，结果发现：草甘膦衍生物的标准工作溶液呈线性关系，线性回归方程为Y=2.26X+0.310 (r2=0.998)，如图1所示。
综上所述，采用的高效液相－质谱联用仪检测武夷岩茶中草甘膦农药的残留量分析方法，操作较简单，添加标样的回收率高，可应用于日常的检测工作中，但相比于用液相色谱仪方法的成本较高。
参考文献：
[1] 李致宝,韦少平,翁德洪,等. 空气(氧气)氧化法制草甘膦的研究进[J].化工技术与开发,2009.38(10):31-33
[2] 苏少泉.草甘膦述评[J].农药,2005.44(1);145-149
[3] 何凯,李园芳,等.草甘膦分析方法的研究进展[J].理化检验（化学分册）.2011.47;991-995
[4] 郑和辉,张静,等.超高效液相色谱串联质谱法直接进样测定水中的草甘膦和呋喃丹[J],分析试验室.2008.27:68-70
[5] 曹赵云,牟仁祥,等.液相色谱－串联质谱法测定稻米中的草甘膦和氨甲基膦酸残留[Ｊ].色谱.2010.28(8):743-748
[6] 周艳明,李娜,等. 板栗中草甘膦残留量测定的高效液相色谱方法研究[J].食品科学.2008.29(9):461-464
[7] 李波,邓晓军,等.高效液相色谱-串联质谱法检测食品中的草甘膦及其主要代谢物氨甲基膦酸残留[J].色谱.2007,25(4):486-490
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