高效液相色谱检测幼儿配方奶粉中维生素添加剂

高效液相色谱检测幼儿配方奶粉中维生素添加剂

实验部分

原理

取适量该品加水超声波震荡提取，经进样器进入高效液相色谱系统，色谱柱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，峰面积定量计算。

标准品溶液配制

精密称取烟酸及烟酰胺标准品适量，分别配制1.0 mg/mL标准品储备液和40 μg/mL标准品中间液。

烟酸及烟酰胺混合标准系列测定液

分别准确吸取烟酸及烟酰胺混合标准中间液0.0 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL于50 mL 容量瓶中，用水定容。该标准系列浓度分别为0.00 μg/mL、0.80 μg/mL、1.60 μg/mL、4.00 μg/mL、8.00 μg/mL。有了保证标准品溶液变质，尽量临用前配。

样品溶液配置

不含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约3.0g（精确到0.0001 g）加入约25 mL的水，于150 mL 锥形瓶中，振摇，需充分溶解，并冷却至室温。

提取：将上述锥形瓶置于超声波振荡器中振荡约10 min。

沉淀及定容：待试样溶液降至室温后，用盐酸（2.4mol/L）调节试样溶液的pH值至1.7±0.1，放置约2 min 后，再用氢氧化钠溶液（2.5mol/L）调节试样溶液的pH值至4.5±0.1。混匀后经滤纸过滤，用水反复冲洗锥形瓶，滤液合并于50mL容量瓶中，用水定容至刻度，滤液再经0.45 μm 微孔滤膜加压过滤，即为试样待测液。

分析条件

检测器：紫外检测器

色谱柱：C18色谱柱（粒径5μm，150mm ×4.6mm）

检测波长：261nm

进样量：10μL

柱温：室温

流速：1.0 mL/min
流动相：

准确量取甲醇70mL，异丙醇20mL，准确称取庚烷磺酸钠1g，用910mL水溶解并混匀后，用高氯酸调pH至2.1±0.1，经0.45μm有机相膜过滤。

标准品色谱图：

0.00 μg/mL标准品溶液色谱图：

0.80 μg/mL标准品溶液色谱图：

1.60 μg/mL标准品溶液色谱图：

4.00 μg/mL标准品溶液色谱图：

8.00 μg/mL标准品溶液色谱图：

色谱图重叠效果图：

样品1标准曲线及线性系数：

样品2标准曲线及线性系数：

样品1色谱图：

样品2色谱图：

计算

计算公式：

X₁ 或₂——试样中烟酸或烟酰胺的含量，单位为微克每百克（μg/100 g）；

m——试样的质量，单位为克（g）；

ci——试样待测液中烟酸或烟酰胺的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

V——试样溶液的体积，单位为毫升（mL）。

试样中维生素烟酸总含量的计算

试样中维生素烟酸的总含量按（2）式计算：

式中：

X——试样中维生素烟酸的总含量，单位为微克每百克（μg/100 g）；

X₁——试样中烟酸的含量，单位为微克每百克（μg/100 g）；

X₂——试样中烟酰胺的含量，单位为微克每百克（μg/100 g）。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。

计算结果

样品1烟酸、烟酰胺含量分别为：0.04μg/100 g、0.31μg/100 g

样品2烟酸、烟酰胺含量分别为：0.04μg/100 g、0.29μg/100 g

结论

该方法检测幼儿配方奶粉中烟酸、烟酰胺含量，具有结果快速、准确、可靠、检出限低等多种优势，可作为幼儿配方奶粉中烟酸、烟酰胺含量检测的首选方法，也可作为类似检测的参考方法，参考价值极高。