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秘籍整理：色谱柱的修复和再生

老多_小多

2015/05/18

液相色谱（LC）

色谱柱是其中很重要的一部分，十八烷基硅烷化键合柱（又称C₁₈柱）就占90％的比例。在长期的液相色谱分析工作中，发现色谱柱使用一段时间后，随着使用时间的推移、进样次数的增加，色谱柱往往会出现柱效降低，色谱峰峰高降低、峰宽加大、分离效果不佳、峰形不流畅的情况，也会有裂峰、肩峰、拖尾峰等情况出现，给日常的分析工作带来一定的困难，严重时直接可以使分析工作停顿下来。而且，挑选质地较好的液相色谱柱，价格约为3000～5000元不等，弃之不用报废实在可惜。为此，我们需要探索出解决此类问题的方法，满足检验要求，降低成本，达到为实验室降损增效的效果。
色谱柱修复再生的理论相关知识介绍：
色谱柱使用久了，会出现分离度降低，理论塔板数降低等柱效降低的现象，适当处理能使柱效恢复。但不是所有柱子都能倒冲的，最好问问生产商。不了解的话，还是按下面的方法处理一下试试。
常规处理:硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱每一次用完后用低流速长时间的二氯甲烷或正己烷等溶剂冲洗;键合相硅胶色谱柱、离子交换色谱柱和凝胶色谱柱先用蒸馏水冲洗,再用甲醇冲洗,然后用甲醇与蒸馏水以一定比例混合的溶液冲洗后过夜。
对于已使用一段时间后柱效下降的色谱柱可按以下方法进行再生。再生处理包括活化(右→左)和净化(左→右)两种。硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱按下列顺序冲洗:三甲基戊烷或己烷←→三氯乙烷←→乙酸乙脂←→丙酮←→乙醇←→水。键合相硅胶柱:蒸馏水←→甲醇(冲洗过程中可加入少量二甲基甲酰胺)。离子交换树脂柱:高浓度的NaCl溶液(1-2molL的NaCl溶液)可使大部分树脂再生,油脂等少数与树脂紧密结合的物质可用低浓度碱溶液(如0.1molL的NaOH溶液)冲洗,酸性有机物吸附在固定相的用低pH缓冲液冲洗,碱性有机物用高pH缓冲液冲洗,然后再用蒸馏水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸馏水冲洗。凝胶色谱柱:由于凝胶色谱柱是根据被分离物质的分子量大小而分离物质,通常用稀的氢氧化钠或非离子型去垢剂(0.2%-1%NP-40或Lubrol)冲洗可除去大部分的结合物质,如果一些污染物仍然不能清除时,用24%或30%乙腈冲洗过夜可除去疏水蛋白,用30%-50%乙酸可除去亲水蛋白,用蛋白水解酶处理可分解凝胶中剩余的痕量胃蛋白酶,然后再用蒸馏水←→甲醇←→蒸馏水冲洗。
已污染的色谱柱的处理:因保留强的物质污染,流动相或样品中不溶物沉积于柱头,可用下列方法洗涤:去除脂类可用四氢呋喃、乙腈或甲醇洗涤;去除蛋白质可用乙腈、丙醇和1%三氯乙酸进行梯度洗脱;一些高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脱,同时反复注入100-200ml的四氢呋喃。
柱头处理:对于柱头堵塞污染严重的情况而且用溶剂冲洗无效的色谱柱,只有打开柱子去除柱顶的填料重装:先拆下不锈钢烧结过滤器,检查柱床,常见凹陷或受污染的带色填料,剔去不规则床层和带色填料,使柱床显白色并完全水平,再用甲醇作糊状填料匀浆液,将糊状填料匀浆液滴在柱上靠重力从匀浆液中排出甲醇液,重复直到填料水平。
色谱柱修复再生的实际操作分享：
1、【色谱技巧】再谈色谱柱的清洗和修补技巧
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20150518/5801580/
2、【第七届原创】拯救”垂死“的高效液相色谱柱
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20141231/5599993/
总结：分叉峰，前肩峰，拖尾峰色谱柱的修补过程，以及图例分析。
3、【第六届原创】您的色谱柱您真的维护好了吗？
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20130731/4880818/
总结：色谱柱填料不同污染图片的分享解读。
4、【第三届原创参赛】一次色谱柱修复经历的全过程纪实
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101218/3011307/
总结：色谱柱污染，修补过程，图片解读全过程。
5、【第二届网络原创参赛作品】岛津反相色谱保护柱的修复
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20091019/2165321/
总结：色谱柱结构解析，污染图片分享，修复过程，修复前后对比，有图有真相。值得学习！
6、【第六届原创】液相色谱柱的修复再生利用研究
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110924/3551523/
总结：分析原因，对策实施，确认效果。峰型异常，再生前后图谱对比，经济效益，汇总说明。
7、【第三届原创大赛】凝胶色谱柱的修复试验
http://bbs.instrument.com.cn/boardlist/bbs/topic/?threadid=3030715&UID=doxw0323&page=
总结：发生问题，分析问题，解决问题，解决结果，结果讨论，有图有真相，学习要收藏！

相关话题

dooby

第1楼2015/05/19

感谢分享好资料

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夏天的雪

第2楼2015/05/19

应助达人

老多师傅辛苦了

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秋醉虞阳

第3楼2015/05/19

并不是很多企业试用的。比如说大型药企，其要求是快速精确检测，重生的液相柱效果好了，但是曲线必须重新验证，甚至重做，而且使用寿命不确定。

0

一片枫叶

第4楼2015/05/19

应助达人

集色谱柱再生理论污染图片分享柱头修复过程为一体，聚峰型对比图例分析结果讨论为导向，汇基础知识实践经验指导学习为目的综合性帖子，值得学习，收藏借鉴，谢谢老多师傅！

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zyl3367898

第5楼2015/05/19

应助达人

清洗后的色谱柱能用多长时间，色谱柱清洗几次后就不能用了。

0

老多_小多

第6楼2015/05/19

新柱子标准曲线也不可能一直用吧？
秋醉虞阳(wangjianhua1102) 发表:并不是很多企业试用的。比如说大型药企，其要求是快速精确检测，重生的液相柱效果好了，但是曲线必须重新验证，甚至重做，而且使用寿命不确定。

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老多_小多

第7楼2015/05/19

一般也就一次吧，有谁做过几次的，站出来
zyl3367898(zyl3367898) 发表:清洗后的色谱柱能用多长时间，色谱柱清洗几次后就不能用了。

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夏天的雪

第8楼2015/05/20

应助达人

筛板经常洗算不算
老多_小多(emoc98311) 发表: 一般也就一次吧，有谁做过几次的，站出来

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夏天的雪

第9楼2015/05/20

应助达人

使用时间也不一定，有长有短，和色谱柱一样和样品之类的有关，但是肯定没有新柱子那么耐用了
zyl3367898(zyl3367898) 发表:清洗后的色谱柱能用多长时间，色谱柱清洗几次后就不能用了。

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夏天的雪

第10楼2015/05/20

应助达人

新柱子修复后是不是也要做个验证
老多_小多(emoc98311) 发表: 新柱子标准曲线也不可能一直用吧？

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