测定贝类食品中麻痹性贝类毒素(PSP)的案例

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2015/08/04

私聊

食品毒素/微生物检测

一、案例
麻痹性贝类是指以石房蛤毒素为代表的，摄食后能产生麻痹作用的存在于贝类体内的海洋生物性毒性物质的总称。麻痹性贝类毒素是一种神经毒素，能阻断神经细胞钠离子通道，对人体神经系统产生麻痹作用，麻痹性贝类毒素很少量时就对人类产生高度毒性，是低分子毒物中毒性较强的一种。主要表现为摄取有毒贝类后15min到2～3h，人出现唇、手、足和面部的麻痹，接着出现行走困难、呕吐和昏迷，严重者常在2～12h之内死亡。
二、选用的国家标准
GB／T 5009．213 2008贝类中麻痹性贝类毒素的测定。
三、测定方法
1．试样制备
(1)牡蛎、蛤、贻贝、扇贝等用清水洗净贝类外壳，切断闭壳肌，开壳，用清水淋洗内部，除去泥沙及其他外来杂质，仔细取出贝肉，勿割破肉体，开壳前不使用麻醉剂或加热。收集约200g肉沥水5min，避免贝肉堆积，拣出碎壳等杂物，贝肉均质。
(2)冷冻贝类室温下将样品自然融化，其余操作同上。
(3)贝类罐头将罐内所有内容物(包括贝肉和汁液)倒入均质器中均质，大容量罐头可以过滤贝肉，分别称重，然后将固形物和汁液按比例昆匀，充分均质。
(4)干贝类等体积0.18mol／L盐酸溶液浸泡24-48h(4C冷藏)，按照上法沥干，分别存放贝肉和酸液备用。
2．保存
样品不能及时送检，可以取200g样品用200mL 0.18mol／L盐酸浸泡，4℃冷藏保存。
3．麻痹性贝类毒素(PSP)标准品对照试验
略。
4．试样提取
①将100g处理后的样品于800mL烧杯中，加0.18mol／L HCl溶液lOOmL，充分搅拌，均质，调pH值于2.0～4.0，需要时可以用5mol／L HCl或0.1mol／L NaoH逐滴滴加，并不断搅拌，防止毒素被破坏。
②混合物加热，徐徐煮沸5min，室温冷却后倒入200mL量筒中，调pH值于2.0～4．0，pH值勿大于4.5，稀释至200mL。
③混合物倒回烧杯中，搅拌均匀，自然沉降至上清液半透明，直至不阻塞针头为止，必要时可以用3000r／min离心上清液或混合物5min。
5．小鼠试验
①取19.0～21.Og健康雄性小鼠6只，称重并记录体重，分空白组和实验组，每组3只。
②对每只实验组小鼠腹腔注射1mL提取液，注射时若有一滴以上提取液溢出，须将该小鼠丢弃，并重新注射1只小鼠。
③记录注射完毕时间，仔细观察并用秒表记录小鼠停止呼吸时的死亡时间(到小鼠呼出最后一口气时)。
④若小鼠死亡时间小于5min，则要稀释样品提取液后，注射另一组3只小鼠，得到5～7min的死亡时间，稀释提取液时，要逐滴加入O.1mol／L或O.01mol／L HCl，调节pH值至2.0～4.0。注射样品后，有1只或2只小鼠的死亡时间大于7min，则需要注射至少3只小鼠以确定样品的毒力。
6．结果计算与判断
(1)待测样品校正鼠单位(CUM)的确定根据待测样品的小鼠死亡时间，在PSP死亡时间一鼠单位的关系中，查出相应的鼠单位；再根据小鼠的质量，在查出质量校正系数，同一只小鼠的鼠单位(MU)与质量校正系数之积，即该小鼠的CUM。选取检测样品受试组中3只小鼠CUM的中位数，即为该样品受试组的中位数。
(2)PSP的计算与结果陈述
①PSP结果计算：
X=CUMl×CF×DF×200
式中X——每100g样品中PSP的含量，μg／100g；
CUM₁一一检测样品受试组小鼠的中位数校正鼠单位；
CF----毒素转换系数；
DF——稀释倍数；
200——样品提取液的体积，mL。
②PSP毒力结果表述：若空白对照组小鼠正常，则报告待测样品中PSP含量为：×××μg／100g。
(3)MU毒力的计算与结果陈述：对于取得麻痹性贝类毒素标准品有困难的实验室可以按照下式，使用鼠单位Mu对检验结果进行计算。
①MU毒力计算：
Y=CUM_l×DF×200
式中Y——每100g样品的MU值，MU／100g；
其余同上式。
②MU毒力与结果表述：空白组正常情况下表述如下。若小鼠死亡时间大于60min，则待测样品的鼠单位即小于0.875MU／g。
若小鼠死亡时间小于5min，则应对样品提取液稀释后，注射另一组3只小鼠，直到得到中位数死亡时间在5～7min为止，根据最后的稀释实验结果计算样品的鼠单位毒力，报告该样品的鼠单位为×××UM／100g。
若实验组中位数死亡时间大于7min，则直接计算确定样品鼠单位毒力，报告该样品的鼠单位为×××UM/100g。
若实验组中所有小鼠在15min内无死亡，则报告该样品鼠单位小于400MU/100g。
7．试剂
①0.18mol／L盐酸：15mL浓盐酸稀释至1L。
②5mol／L盐酸：41.7mL浓盐酸稀释至100mL。
③O.1mo1／L氢氧化钠溶液：4．Og氢氧化钠溶于1L水。
④PSP毒素(saxitoxin)标准溶液(10μg／mL)：20％乙醇溶液，用5mol／L盐酸调节pH值至2.O～4.O，用该液配制PSP标准溶液。
⑤小鼠：体重在19～21g的雄性小鼠。
⑥蒸馏水(pH=3)：用盐酸调。
8．仪器
①均质器。
②离心机。
③天平。
④注射器。
⑤电炉。
⑥秒表。
⑦玻璃器皿。