合成反应的监测及合成产物的分离纯化一般步骤

实验目的：研究化合物合成反应监测及分离纯化一般步骤。

一、监测合成反应

TLC-MS检测，确定是否有合成产物：

1、将待测样品通过硅胶板爬板分开。

（其实板爬的不歪，只是照片上有点歪，截完图就成这样了。）

2、利用TLC-MS仪器快速检测TLC板的两个点，确定目标物。

点1质谱检测图谱：

点2质谱检测图谱：

结论：经TLC-MS检测，合成反应有效，点2中含有分子量432的目标物，点1为原料。

二：液相分析
由于目标物极性较小，液相分析色谱柱选用C18色谱柱保留太强，因此选用保留稍弱的C8色谱柱。
色谱条件如下：
色谱柱： C8 5 μm 100 Å 4.6*250 mm
流动相：A：水
B：乙醇
流速：1.0 mL/min
检测器：ELSD，65℃
梯度：

27.448min峰为目标峰

三、分离纯化：
经测试：硅胶柱纯化条件不能把目标物前21-26 min杂质分离除去，C8柱纯化条件不能将26.1 min和27.9 min杂质分离除去。因此最终方案选用C18色谱柱，以甲醇和二氯甲烷为流动相，达到了很好的分离效果。
纯化条件如下：
色谱柱：C18 10 μm 100 Å 30*250 mm
流动相：A：甲醇
B：二氯甲烷
流速：35 mL/min
紫外波长：210 nm（红色信号线）
ELSD：65℃（浅蓝色信号线）
梯度：

制备图谱如下：

馏分收集：收集10.3-11.7 min和21.3-23.4 min馏分
四、纯度检测（条件为液相分析条件）：
1、 10.3-11.7 min馏分：取200 uL馏分，氮吹干，加200 uL甲醇溶解，进样10 uL检测，检测结果如下：

2、 21.3-23.4 min馏分：取200 uL馏分，氮吹干，加100 uL甲醇溶解，进样10 uL检测，检测结果如下：

结论：
1、合成反应可以利用TLC-MS设备快速监测合成反应成功与否。
2、根据待分离样品的极性和硅胶板上的保留，选择合适的填料和流动相，摸索纯化条件。

五、总结：
1、合成反应可以利用TLC-MS设备快速监测合成反应成功与否。
2、根据待分离样品的极性和硅胶板上的保留，选择合适的填料和流动相，摸索纯化条件。
六、实验心得：
1、利用TLC-MS检测仪，直接检测TLC板上的样品点，不需要将硅胶板上的点刮下来再处理后扫质谱。
2、部分极性较小的样品可以用C18色谱柱，配二氯甲烷等弱极性试剂作为流动相进行分析或纯化。
3、对于紫外吸收弱的样品，可并联蒸发光散射检测器，由于ELSD为分析型检测器，在大流速制备情况下，需要调节分流比，ELSD的分流速不能高于0.5 mL/min，以防检测器过载。
4、制备条件下，由于并联检测器分流比差别大，且检测过程耗时不同，两个检测器在图谱中出现信号的时间就会有差异。这时需要提前判断两个信号的相对延迟时间，通常以流速大的紫外信号作为收集信号。
5、紫外下吸收很弱的样品，放大到制备，加大上样量后，紫外下也会有吸收，也可作为制备收集的信号。
6、当制备馏分溶剂为弱极性溶剂时，而检测条件的流动相为较强极性流动相，或存在溶剂不互溶问题，需要将制备馏分浓缩干，再用接近检测条件流动相极性的溶剂溶解，进行分析，避免溶剂效应。