QuEChERS-高效液相色谱串联质谱法检测蛤蜊中的扑草净的残留量

huiyaru

2015/09/06

私聊

农残检测

QuEChERS^【¹^】-高效液相色谱串联质谱法检测蛤蜊中的

扑草净的残留量

惠欣欣*，蔡柳燕，臧金海，魏树龙，马继军，梁春实

（锦筑（烟台）食品研究开发有限公司，烟台264006）

摘要：本文建立了蛤蜊中扑草净药物残留量的高效液相色谱-串联质谱检测方法。该方法借鉴AOAC Office Method 2007.01^【¹^】对QuEChERS^【²^】农药分析方法进行了样品提取和净化的改进，采用多种吸附剂对样品进行萃取净化^【³^】，极大改善了净化效果，提高了方法灵敏度。样品经乙腈提取后，用石墨化碳、ODSC18、PSA三种吸附剂粉末进行分散型固相萃取（Dispersive-SPE）^【⁴^】净化，经过上述方法处理净化效果良好。实验结果显示，扑草净在浓度0.5～500μg/kg时，线性关系良好（R2>0.99），定量下限为1μg/kg。样品加标的平均回收率为83%，相对标准偏差为（RSD%）3%。

该方法简单、快速、准确，可用于蛤蜊样品中扑草净残留量的检测。

关键词：扑草净；QuEChERS；高效液相色谱-串联质谱；检测方法

QuEChERS-HighPerformance Liquid Chromatogrphy Tandem Mass Spectrometry Method for Detectionof Residues of Prometryne in Clam

Abstract:The high performance liquid chromatography tandemmass spectrometry (HPLC-MS/MS) methods have been established for thedetermination of prometryne residues in long surf clam. The improvements of theQuEChERS method were made in two sides: extracting and purifying, resulting inincreased sensitivities and purer matrix. Form the pretreatment methods of AOACOffice Method 2007.01,the sample extract with acidified acetonitrilegraphitized carbon C18, PSA three adsorbent powder dispersed in solid phaseextraction-n (Dispersive-SPE) Purification. Results showed that good linear wasobtained in the concentration range of 0.5～500ng/L with acorrelation coefficient of 0.99. The method was carried out at two spikinglevels, the average recoveries were 83% for the samples with RSD of 3%The LODof prometryne was 1μg/L in the samples.

Themethod is sample, fast and credible, so it can be applied to screening anddetermination of prometryne in long surf clam samples.

Key words：prometryne；QuEChERS；HPLC-MS /MS；determination

惠欣欣（1989年～）女，汉族，学士，助理工程师，农兽药残留检测，技术员，威海市海洋环境监测中心，山东省威海市经高新区大连路4号，邮编264200。

一.背景和目的

扑草净，又称扑草净胺，别名捕草净、割草佳、扑蔓尽，英文名为prometryne，内吸选择性甲硫基三氮苯除草剂。化学结构式：

1959年瑞士嘉基(Geigy)公司首先开发。

纯品为白色结晶，熔点118～120℃，有臭鸡蛋味，蒸气压为133.322×10^-6帕，20℃水中溶解度为48毫克/升，易溶于有机溶剂。常温下稳定，高温下遇酸、碱能水解。不燃、不爆、无腐蚀性。大鼠口服LD₅₀为2500～3750mg/kg，对鲤鱼LC₅₀(90小时)为8～9mg/kg。对人畜低毒，对鱼有毒性中等。休药期不低于500度日。在农业生产中主要用于大豆、麦类、花生、果树、蔬菜及水稻田等防除稗草、野苋菜、马齿苋、车前草等1年生禾本科及阔叶草，是农业生产使用较为广泛的除草剂；而在水产养殖业中主要用于清除鱼、虾、蟹、贝、海参等养殖水体中的丝状藻类(青苔)、大型草类及有害藻类。

贝类和贝类产品是我国出口水产品之一,主要目标市场包括美国、加拿大、日本、韩国等国家。日本厚生劳动省2012年3月19日发布消息，根据2011年进口食品的监控检查计划（于2012年3月16日最终修订为食安输发0316第2号）及在过去一年内的检查结果，决定对我国产蛤蜊等双贝壳类中扑草净项目实施强化监控检查，进口抽检比例为30%。2012年5月18日，日本厚生劳动省医药食品局食品安全部监视安全课发布食安输发0518第1号文，对中国产蛤蜊和缢蛏实施扑草净的命令检查，日本日前已经开展贝类及其产品扑草净的监测工作，限量要求10 μg/kg。为保护我出口水产企业的经济利益，维护出口贸易的正常进行，增强企业自检自控的能力，建立蛤蜊中扑草净药物残留量的快速检测方法具有重要意义。

二.实验部分

（一）实验器材和试剂

器材：Quattro microtmAPI液相色谱—串联质谱仪：美国Waters公司；台式离心机：eppendorF Centrifuge 5810；均质机：IKA T25；电子天平：日本岛津Shimadzu auw 120d、Shimadzu uw420s；漩涡振荡器：IWAKI；移液器： 1mL和0.2mL，吉尔森；0.22μm有机相针式过滤器：尼龙，上海安谱实验科技股份有限公司。

试剂：乙腈（CH3CN）：农残级；冰乙酸（CH3COOH）：色谱纯；dSE萃取管(AOAC,2007.01)袋装缓冲盐颗粒状硫酸镁(6g MgSO4 +1.5 gcH3COONa)：上海安谱实验科技股份有限公司；

dSE纯化管(AOAC,2007.01：含色素和脂肪的果蔬)粉状硫酸镁(150 mg MgSO4 + 50mg PSA +50mggcB + 50mg C18)：上海安谱实验科技股份有限公司；水：实验室一级水。

（二）标准品溶液的配制

2.1农药标准品储备液

称取20mg扑草净纯品标准物质，用丙酮定容至10mL得到2000mg/L的高浓度标准品储备液；用2000mg/L农药高浓度标准品储备液，取1mL用乙腈定容到20mL稀释到100mg/L，重复上述操作将100mg/L的标准品储备液稀释为5mg/L，转移到储备瓶中，在-20℃下保存。

2.2.农药标准品工作液

根据需要使用乙腈系列稀释至0.5～500μg/L等各种浓度的农药标准品工作液；250μg/L标准品工作液-20℃下保藏，可使用一个月。

（三）HPLC-MS/MS条件

3.1 液相条件

色谱柱：Inertsil ODS-4（3 μm 2.1*150 mm）；柱温：40 ℃；

流动相：0.1 %的甲酸水溶液+乙腈（6+4，体积比）；流速：0.25 mL/min；进样量：10 μL。

3.2 质谱条件

离子源条件：毛细管电压3.2 kV，一级锥孔电压2 V，RF透镜电压0.4 V，离子源温度130 ℃，去溶剂温度400 ℃，去溶剂气(氮气)流量800 L/hr，锥孔气(氮气)流量50 L/hr。

质量分析器条件：MS1高、低端分辨率13，MS1离子能量0.6，碰撞气：氩气，碰撞室进口电压-2 V，出口电压2 V，MS2高、低端分辨率13，MS2离子能量2.6。

质谱参数见表1（其中子离子158.0作为定量离子）。

3.3 实验谱图

质谱参数见表1。在本研究的质谱条件下，正离子模式下扑草净的MRM图见图1。

表2-1 扑草净的质谱分子参数

药物名

母离子

子离子

锥孔电压

碰撞能量

离子模式

扑草净

241.10

158.0*

30

44

ESI+

200.0

19

67.8

37

图1 在正离子模式下扑草净的MRM图谱

（四）前处理方法

4.1提取

称取15 g样品于50mL离心管中，加入15 mL 1%的醋酸乙腈溶液、1.5 g的无水醋酸钠、6 g的无水硫酸镁即dSE萃取管(AOAC,2007.01)袋装缓冲盐颗粒状硫酸镁，均质1分钟；3500转/分钟离心2分钟；

4.2净化

取上清液1 mL于dSE净化管(AOAC,2007.01：含色素和脂肪的果蔬)粉状硫酸镁(150 mg MgSO4 + 50mg PSA +50mg gcB +50mg C18)，涡旋1分钟进行分散型固相萃取净化， 3500转/分离心10分钟。

4.3 装瓶

取净化后的上清液过0.22 μm的亲水相针式过滤器到样品瓶中，进行HPLC-MS/MS分析。

三、结果与讨论

（一）定性方法的确立

在相同的实验条件下，试样与prometryne标准物质在LC-MS/MS色谱图上的保留时间一致，质谱图中所选择的离子均出现且监测离子相对于基峰的丰度比符合表2-2的要求,可判定该试样中存在prometryne这种化合物。

表2-2　试样离子相对丰度的允许偏差范围（源自GBT 20769-2008）

相对丰度/%

允许偏差/%

＞50
±20

＞20～50

±25

＞10～20

±30

≤10
±50

（二）定量方法的确立

以标准物质中扑草净定量离子m/z：242.16＞158.0峰面积时间下的检测物峰面积外标法0.25mg/L单点定量。

（三）实验谱图

空白实验、阳性样品以及0.01mg/L 的标准品工作液的谱图见下图2-4。

图2 在正离子模式下溶剂空白的MRM图谱

图3 在正离子模式下阳性样品的MRM图谱

图4 在正离子模式下定量下限0.01mg/L MRM图谱

（四）回收率及精度确认

在0.1 mg/L添加水平对蛤蜊做n=5的添加回收实验，统计扑草净回收率，测得扑草净的回收率，结果见下表2。

表2 蛤蜊中扑草净回收率及RSD%

农药名

N1

N2

N3

N4

N5

平均值

RSD%

扑草净(%)

85

82

86

81

80

83

3

图4 在正离子模式下定量下限0.01mg/L MRM图谱

（五）线性确认

分析0.00050 mg/L、0.0010 mg/L、0.010 mg/L、0.050 mg/L、0.10 mg/L、0.25 mg/L、0.50 mg/L标准溶液，绘制标准曲线，见图5。从图5可见该方法中扑草净在0.00050～0.5 0mg/L浓度范围内线性相关系数R² =0.995，线性良好。

表 3扑草净的线性范围、线性方程、相关系数

农药名称线性范围/ (mg/L) 线性方程 R²

扑草净0.00050～0.5 0 Y = 44458*X 0.995

图5绘制扑草净工作曲线表
- 定量下线的确认
  分析0.00050 mg/L标准溶液，结果满足定量限0.0010mg/L的要求，出峰情况见图6。
  图6 0.00050 mg/kg 标准品溶液的MRM图
  
  结论
  该方法建立了蛤蜊种扑草净的HPLC-MS/MS快速检测分析方法，操作简便具有较高的灵敏度和准确度，检出限远低于日本对扑草净药物残留检测限量一律基准值的要求。样品目标物保留时间处没有明显的基质峰，标准曲线在0.00050～0.5 0mg/L浓度范围内7点线性相关系数R²>0.999，在0.1 mg/L添加水平回收率在83 %范围，RSD%为3%。
  参考文献
  
  AOACOfficial Method 2007.01 Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile Extractionand Partitioning with Magnesium Sulfate Gas Chromatography/Mass Spectrometryand Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry First Action 2007, 2007AOAC INTERNATIONAL.
  LEHOTAY S J. Quick, easy, cheap,effective, rugged, and safe (QuEChERS) approach for determining pesticideresidues. Humana Press, USA Nov. 2004.
LEHOTAY S J, MASTOVSKA K, YUN S J. Evaluation oftwo fast and easy methods for pesticide residue analysis in fatty foodmatrixes. Journal of AOAC INTERNATIONAL, 2005, 88：630-633.

ANASTASSIADAS M，LEHOTAYS J，STAJNBAHER D.Fast and easy multiresidue method employing acetonitrileextraction/partitioning and ‘dispersive solid-phase extraction’ for thedetermination of pesticide residues in produce . Journal of AOACINTERNATIONAL, 2003, 86:412-413.