使用MIP-SDR苏丹红专用SPE小柱检测调味料油辣椒中的苏丹红I
实验目的
采用《GBT 19681-2005 食品中苏丹红染料的检验方法 高效液相色谱法》，适用于食品中苏丹红染料的检测。样品经溶剂提取、固相萃取净化后，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。国标中提及氧化铝层析柱需自制，中性氧化铝105℃干燥 2h，于干燥器中冷至室温，每100g 中加入2mL 水降活，混匀后密封，放置12h 后使用。活度的调整采用标准溶液过柱，将1ug/mL 的苏丹红的混合标准溶液1mL 加到柱中，用5%丙酮正己烷溶液60mL 完全洗脱为准，4 种苏丹红在层析柱上的流出顺序为苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅲ，可根据每种苏丹红的回收率作出判断。苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ的回收率较低表明氧化铝活性偏低，苏丹红Ⅲ的回收率偏低时表明活性偏高。操作相当繁琐，我们运用安谱公司MIP-SDR苏丹红专用SPE小柱处理，洗脱液浓缩定容后经0.22微米滤头后，进行液相色谱分析。
1. 仪器设备
高效液相色谱仪（岛津LC-20A），荧光检测器（岛津RF-20A），色谱柱（Inertsustain- C18 250mm*4.6mm/5um）,MIP-SDR苏丹红专用SPE小柱(CNW）
2. 试剂
丙酮（分析纯）；正己烷（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；无水硫酸钠
3. 分析步骤
称取试样10.0g于离心管中，向离心管中加入10ml水再加入30ml正己烷，高速均质5min， 3000r/min，离心10min，（在离心过程中若取样量加大，可使用100mL离心管）吸出正己烷层，过无水硫酸钠至鸡心瓶中，再向离心管中加入20ml*2正己烷，高速均质、离心，合并正己烷层，无水硫酸钠过滤到鸡心瓶中，最后氮吹蒸发干在保持5min，用5mL正己烷溶解残渣。
SPE柱先活化：先用5ml二氯甲烷，再用5ml正己烷，进行活化。
上样：样液到小柱子里面，用2ml正己烷润洗鸡心瓶倒入小柱子
淋洗：用5ml正己烷淋洗小柱子
洗脱：用5ml二氯甲烷，并收集洗脱液
浓缩定容：40℃氮吹干，用1ml乙腈定容，超声1min，漩涡20s，过0.22um的膜，上机。
4.仪器条件
4.1色谱柱： C18 250mm*4.6mm/5um （或相当型号色谱柱）
4.2流动相：
溶剂 A 0.1%甲酸的水溶液：乙腈 = 85：15
溶剂 B 0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20
4.3梯度洗脱（梯度见图1）：流速:1mL/min 柱温：30℃
4.4检测波长：苏丹红Ⅰ 478nm 13min后波长变成520nm
图1 梯度
5. 结果分析
样品中苏丹红的测定
按照上述方法进行苏丹红标液0.2mg/L检测，见图2，样品中苏丹红的色谱图如图3所示，未检出，基线波动较小，同时做了苏丹红I单标定性、苏丹红I加标实验，见图4、5，保留时间11.3min，并无杂质干扰。加标浓度为5.0mg/L，加标回收率为91.48%。
图2 0.02mg/L苏丹红标液的色谱图
图3 样品苏丹红的色谱图
图4苏丹红I单标的色谱图
图5苏丹红I加标的色谱图
3. 结论
本试验利用MIP-SDR苏丹红专用SPE小柱类似分子印迹技术吸附苏丹红，使用溶剂少，建立了一种快速，高效，可靠的检测技术。具有较高回收率，可达91.48%，适用食品苏丹红的检测。但后期做了基质更为复杂的辣椒酱，测其苏丹红，出现杂峰较多，造成基线不够平稳，淋洗液可尝试改为用3% 异丙醇-正己烷溶液淋洗，希望安谱公司进一步解决。
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