仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯

求助糖硅烷化衍生方法

气质联用(GCMS)

  • 我要检测蜂蜜中的低聚糖主要包括二糖和三糖,想用HMDS衍生。
    按照文献中的方法,标样溶解在80%乙醇中,氮吹干后,在55℃烘箱烘干30分钟,先加入200 uL 2.5%盐酸羟胺(溶于吡啶),此时溶液是澄清的,在75℃反应30min,然后加入200 uL HMDS+TMS_PYRIDINE(3:1:9)衍生剂, 问题出现了,一加入衍生剂溶液就变白变浑浊,后来还产生了沉淀也是白色的。没有理会,继续45℃反应30min。想过膜进样。发现浑浊的反应液过膜后颜色还是发白看起来也是浑浊的。根本没法进样。
    后来我吸了点HMDS+TMS_PYRIDINE(3:1:9)衍生剂到空离心管中,发现衍生剂也不是很澄清,看着有点发白浑浊的样子。是衍生剂失效了吗?
    我分析可能出现问题的点:
    (1)样品没有完全干燥,反应体系中有水,所以水和吡啶反应使溶液发白。
    (2)购买的盐酸羟胺和吡啶都是分析纯的,是不是试剂纯度不够,所以后来加入衍生剂后和杂质反应。。。(猜想)
    (3)就是购买的衍生剂有问题了,过期了。但是衍生剂是那种购买来就预混好的分装在1mL小管里的,平时都保存在4度冰箱。
    希望论坛里各位大牛们帮忙分析下问题出在哪里,在此先谢过啦
  • 该帖子已被版主-symmacros加3积分,加2经验;加分理由:发帖
    +关注 私聊
  • symmacros

    第1楼2015/09/18

    应助达人

    楼主的保存条件下,衍生试剂应该不会失效的。
    楼主能不能试试不加样品的空白试验,看看有无沉淀呢?

0
    +关注 私聊
  • 问小雅

    第2楼2015/09/21

    我下次做的时候试下,谢啦。

    symmacros(jimzhu) 发表:楼主的保存条件下,衍生试剂应该不会失效的。
    楼主能不能试试不加样品的空白试验,看看有无沉淀呢?

0
    +关注 私聊
  • 问小雅

    第3楼2015/09/23

    自己来回复:
    第二次重复做了一遍,还是会变浑浊,有沉淀。反应完后离心,然后过膜进气质。发现衍生化效果还不错。
    浑浊的原因可能就是反应体系中有水,有颗粒物的原因应该是盐酸羟氨盐不能被衍生化,所以会析出。多加点硅烷化衍生试剂,保证样品能充分衍生就ok.
    接下来优化气相色谱条件。希望一切顺利。

0
  • 该帖子已被版主-花开见我加3积分,加2经验;加分理由:感谢反馈!
    +关注 私聊
  • l777511b

    第4楼2015/09/30

    白色的就是 水解啦 糖可以用GC-MS做,不错

0
    +关注 私聊
  • 千层峰

    第5楼2015/10/06

    衍生试剂都是过量的,可以加多点

    问小雅(v3037031) 发表:自己来回复:
    第二次重复做了一遍,还是会变浑浊,有沉淀。反应完后离心,然后过膜进气质。发现衍生化效果还不错。
    浑浊的原因可能就是反应体系中有水,有颗粒物的原因应该是盐酸羟氨盐不能被衍生化,所以会析出。多加点硅烷化衍生试剂,保证样品能充分衍生就ok.
    接下来优化气相色谱条件。希望一切顺利。

0
    +关注 私聊
  • 问小雅

    第6楼2015/10/08

    你的意思是衍生产物,水解了吗??
    发白的样品进气质检测,也能检测到衍生产物。

    l777511b(l777511b) 发表:白色的就是 水解啦 糖可以用GC-MS做,不错

0
    +关注 私聊
  • 问小雅

    第7楼2015/10/08

    关于糖HMDS衍生完反应产物是否可以保存的问题
    亲身经验:由于放假的原因,将二糖标准品和蜂蜜样品的HMDS衍生反应物保存在-20℃冰箱3天,节后拿来上机检测,还是能检测到衍生产物。但是楼主没有进行定量分析,不知道衍生产物的具体分解率。
    衍生产物遇水会分解,所以只要避免水分,应该讲解不会很厉害。

0
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
举报帖子

执行举报

点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...