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一个鸟苷酸类似物,UPLC峰面积不成线性。

  • moshanghuakai
    2016/03/18
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 目标化合物的结构:

    仪器:Waters H-class
    色谱柱:BEH Amide, 2.1*100mm, 1.7um
    用的条件:1. A相:10mM甲酸铵/甲酸, pH3
    B相:已腈。
    温度:35度
    样品稀释液:流动相
    结果:峰很宽,拖尾(如图1)

    2. 换条件(因为BEH amide 柱推荐用碱性条件)
    A相:10mM 碳酸氢氨/氨水, pH10.6 (柱子pH 范围2-11)
    B相:已腈
    温度:35度
    梯度:0mim, 10%A+90%B; 5min,50%A+50%B; 9min, 90%A+10%B; 11min, 90%A+10%B, 11.1min, 10%A+90%B; 16min 10%A+90%B. 结果如图2:

    但是,多跑几针之后,结果就变成了下图,就是峰上鼓出个包:

    现在的问题是,即便使用第二钟方法,但梯度稀释后做标曲,峰面积不成比例,或高或低。想听听各位高手的意见,拜托拜托了。我已经辛苦做了几个月了。再拜,再拜。
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  • moshanghuakai

    第1楼2016/03/18

    我自己先顶一个贴。跑久了,峰会鼓个包出来,是不是柱子不行了。还有柱子不容易平衡了,以前可能10分钟就平衡住了,现在需要更久了,流速没变。

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  • isomer

    第2楼2016/03/18

    您好,新手上路版的帖子浏览量较少,转到LC 版了。
    下次发帖记得到对应版面,以免耽误您的问题。

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  • moshanghuakai

    第3楼2016/03/18

    您帮我转过去了?还是我自己转一下啊,新手多关照啊。

    isomer(ijingle) 发表:您好,新手上路版的帖子浏览量较少,转到LC 版了。
    下次发帖记得到对应版面,以免耽误您的问题。

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  • 有水有渝

    第4楼2016/03/18

    应助达人

    加三乙胺看看能不能抑制拖尾,分离度不够。把PH往3以下调,最低可以调到2.2。

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  • moshanghuakai

    第5楼2016/03/18

    好吧,我调到3还是一个大包,就不敢调了,看了hilic 说明书,原理是调到化合物的全部形式是离子,这样就能既不拖尾,又能增加保留。所以就调到了10.6。这东西在C18上是完全没保留。

    有水有渝(xky0230699) 发表:加三乙胺看看能不能抑制拖尾,分离度不够。把PH往3以下调,最低可以调到2.2。

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  • moshanghuakai

    第6楼2016/03/20

    没人理我啊,谁帮我顶一下啊。求助啊,大神们。

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