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求助氨基酸柱前衍生

逗号dian

2016/03/30

液相色谱（LC）

我看了一篇关于D,L-氨基酸检测的文章，用c-18柱子和柱前衍生的办法能分析某些氨基酸，衍生剂是OPA和Boc-L-Cys，我的衍生剂配法是两种衍生剂各0.1g用1mL无水乙醇溶解，加入100μL的巯基乙醇做还原剂，再用pH6.5的硼酸盐缓冲液定容至10mL，在线的柱前衍生。流动相是磷酸盐：乙腈：四氢呋喃（A:92:5:3,B：45:50:5,V:V）线性洗脱。柱温40℃，荧光检测，激发和放射波长为334和443。
我做的标样是0.1g/L的D-Arg和L-Arg，但是同一个样品跑出来的峰毫无重现性，也看不出什么规律，有时2分钟就出峰，有时20多分钟出峰，峰形也很怪。
请教我的衍生剂配法有没有问题，问题可能出现在哪里呢，还有什么要注意的吗？我第一次用液相，求教啊

分
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相关话题

夏天的雪

第1楼2016/03/30

应助达人

把每一针的进样时间设置的长一些

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逗号dian

第2楼2016/03/30

应该不是这个问题，我这个线性洗脱的时间就有85分钟，进样时间是90分钟
夏天的雪(bingwang228) 发表:把每一针的进样时间设置的长一些

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有水有渝

第3楼2016/03/31

应助达人

楼主把文献发上来看一下，然后你分析的是哪些氨基酸，多种氨基酸要用梯度洗脱，等度下不可能有好的分离度，且分析时间不少于30分钟
进一个空白针看看，2分钟出来的很可能是衍生试剂等空白。

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逗号dian

第4楼2016/03/31

文献中是做的多种氨基酸，是梯度洗脱的。我只需要分离D和L精氨酸，也是做的梯度洗脱，时间是80分钟，那个2分钟的峰是有时有有时没，不知道我的问题出在哪
有水有渝(xky0230699) 发表:楼主把文献发上来看一下，然后你分析的是哪些氨基酸，多种氨基酸要用梯度洗脱，等度下不可能有好的分离度，且分析时间不少于30分钟
进一个空白针看看，2分钟出来的很可能是衍生试剂等空白。

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夏天的雪

第5楼2016/03/31

应助达人

只分析DL精氨酸可以不用这么复杂，可以尝试优化一下色谱条件

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逗号dian

第6楼2016/03/31

请问是指不需要梯度洗脱吗？我该怎么优化流动相成分的比例呢？
夏天的雪(bingwang228) 发表:只分析DL精氨酸可以不用这么复杂，可以尝试优化一下色谱条件

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09092429

第7楼2017/11/20

你好，我最近也在做氨基酸液相柱前衍生，效果不怎么好，可以分析交流下检测方法吗？

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hujiangtao

第8楼2017/11/20

应助达人

柱前衍生不如柱后稳定

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有水有渝

第9楼2017/11/21

应助达人

中文方法与各仪器厂商都分析包都很多，楼主看英文的对我有很大的挑战。主要还是衍生条件再检查一下，最好拿纯的D和L精氨酸先衍生一下，不要直接做样品，另外反相色谱上能分享D与L构型吗？

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兰博仪器

第10楼2017/11/24

用柱后衍生法效果好。

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