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西游漫话之二：经可常念，路勿重走

一片枫叶

2016/07/16

液相色谱（LC）

话说：【八戒】听了如来佛祖的言训，像变了一个人似的，乖乖的不再偷懒；【无忌】并没有什么改变，还是像往常一样，少言寡语闷闷不乐，整日心事重重；而【唐僧】却相反，如吃蜜一般，心里甜滋滋的喜形于色，这不难理会——其一：分析故障得以解决，其二：【悟空】逛论坛回来学到了很多。
兴奋之余，有了一些冲动，于是乎便招集徒儿商量下一步该如何运行。【悟空】很是聪明，早已看透师父的心情，便蹿到师父跟前献言道：师父，您有何指教？讲讲…快讲讲！
【唐僧】顺水推舟道：师父正要问你，此次光顾论坛有何收获……
正合【悟空】心意，他正想择机炫耀一下在论坛的所见所闻涅，这下机会来了，急忙中未等话音落痰，便回言道：“此次光顾论坛，不虚此行，受益匪浅，收获多多……”

“嗯嗯…净说好听的，还'受益匪浅，收获多多'，我和三弟的问题还没有解决呢？”【八戒】心里不服气，嘴里嘟噜着。
【悟空】很是生气，瞪了【八戒】一眼，显出不屑一顾的神态，为了证实所言属实，便拔了几根猴毛放于手心，用嘴一吹，只见那猴毛魔术般地变成了几张图，然后几分调戏地说：“【八戒】你来看看，解读一下这些部件如何使用保养？”
【八戒】丈二和尚摸不着头脑，盯着下面的图片，口瞪目呆哑口无言……

溶剂吸滤头——可有效滤除流动相中的固体颗粒杂质，但未经过滤的溶剂或溶剂瓶中生长的微生物都会降低溶剂入口过滤头的寿命和泵的性能。一定要定期清洗或更换溶剂吸滤头。
吸滤头表面总是粘着小气泡——最大的可能就是你的流动相没有脱气。尤其是水相和有机相混合的情况，一定要减压抽滤才行。
吸滤头内侧或者开泵之后管路里面有气泡——就是吸滤头污染了
不锈钢的吸滤头——用3%-5%的稀硝酸超声10min，再更换纯甲醇或异丙醇超声10min，没有改善买新的。
安捷伦的玻璃吸滤头——不要超声，以免破坏其过滤筛板。甲醇或异丙醇浸泡过夜，看看效果，实在不行买新的。
针式过滤器——是色谱样品过滤时最常用的产品，针式过滤器根据滤膜的材质分为：水系滤头(一般为聚醚砜，醋酸纤维素等材质)，有机滤头(尼龙66)，PTFE，PVDF等
针式过滤器根据其直径分一般最常用为13mm和25mm两种. 根据其孔径分：一般最常用为0.22um和0.45u两种。
真空微膜过滤器——是液相色谱分析必用的装置，根据操作需要选用不同的滤膜，达到除去溶剂内杂质.提纯.消菌的作用，在色谱分析中经过它过滤的溶剂，不仅能延长色谱柱的使用寿命，而且由于它的真空除气作用，明显提高分析精度。

在线过滤器——放在泵和进样阀或自动进样器之间，只过滤流动相，不过滤样品，是针对流动相保护柱子的。预柱或保护柱放在分析柱前，预柱的作用主要是再次过滤流动相和样品，在柱前起过滤固体颗粒的作用，不具有分离的效果。
如果出现柱压高的情况，有可能是固体颗粒物质堵塞了在线过滤器的筛板，需要清洗筛板。打开在线过滤器卡套，取下筛板，分别用水和甲醇各超声10min，然后放回卡套。
保护柱——是与色谱柱同等作用的，其填料与色谱柱相同，对色谱柱起保护作用——对强保留,强酸性,强碱性的物质预先保留，防止色谱柱污染，并过滤进样阀因磨损而产生的末削颗粒进入色谱柱。
柱压太高、柱效下降或分离度下降等影响分离的因素出现时就应该考虑更换保护柱。

过滤白头——安捷伦Purge阀里面那个柱芯状聚合物滤膜，相当于waters的在线过滤器滤芯。当泵关闭一段时间或在通道中使用挥发性溶剂时，为防止溶剂过滤器堵塞和长菌，若出现过滤白头有黑色或黄色污染层时，应更换过滤白头。判断：使用纯水，打开purge 阀，设置流速5ml/min，观察压力，如果超过10bar，应该更换过滤白头。

单向阀中最关键的部件是宝石球和宝石球座，宝石球是非常光滑的球体（一般都是人造红宝石)，球座为圆矩形（人造蓝宝石），宝石球在球座的锥面上，可以达到非常好的密封效果。
宝石球和球座之间的紧密贴合是密封的必要条件。当宝石球或球座受到污染时，会导致二者接触不够紧密，从而影响密封效果。这种情况经常发生在使用了劣质有机溶剂，流动相没有过滤，或者使用了缓冲盐的时候造成的盐析污染。
单向阀故障通常有两种情况：
1. 单向阀被堵死。其外在表现为：液体出不来，无压力显示。这种情况往往是宝石球和球座粘住了，流动相进不去，当然也出不来。其原因，一般都是用过缓冲液作流动相，由盐存在粘住的，或者流动相较脏、粘度高而引起的。
2. 单向阀被污染。其外在表现为：压力波动大。这种情况通常都是球座上有细微的固体颗粒，固体颗粒有可能是盐析出，尤其是在使用缓冲液作流动相后，导致宝石球和球座密封性不好，流动相有回流现象。
处理方法：当确认是单向阀故障后，将单向阀小心拆卸下来进行清洗
单向阀清洗方法：
1：拆下入口单向阀和出口单向阀部件，取出阀芯（通常拆下入口单向阀清洗即可，如仍未解决，将出口单向阀也拆下一并清洗）；
2：将阀芯依次放入水、异丙醇、甲醇中，并分别在超声波清洗器中清洗 15min - 20 min；
3：将阀芯分别装回入口单向阀和出口单向阀（一定要注意方向），并用开口扳手拧紧泵头；
完了后，可以拿洗耳球吹一下，顺着箭头方向可以吹动，逆着箭头方向应该一点气体都不能吹过去，还有好的单向阀把它放到耳边轻轻摇晃，能听到小球的撞击声，如果听不到，或单向阀两头都吹不动，可以把单向阀的不锈钢部分轻轻在桌面上磕几下，然后重复上述清洗办法。接下来，将单向阀按原样装上，注意不要将进口阀和出口阀装错，还有单向阀的箭头一定要保证是向上的。之后，先用针将泵中空气抽出，按正常操作顺序开启泵，检查有无泄漏点，检查泵压是否正常。此时流动相一般为甲醇。如果还有压力不稳或测不到泵压，请重复以上处理操作。
预防“单向阀故障”的措施
流动相一定要先超声，再经0.45μm膜过滤。使用盐缓冲液作流动相后，先用10%甲醇水冲洗管路，将盐冲出，然后按照正常洗色谱柱程序进行冲洗即可，最后保存在甲醇里。切记：缓冲盐类溶液万万不可在液相系统中过夜，或长时间保存。
【悟空】滔滔不绝，口似悬河，一口气说出了那么多，【沙僧】听得津津有味，赞不绝口，解决了他色谱分析的疑虑，更解决了他遇到的问题；【八戒】却没有听太懂，但有一点听得最清：流动相一定要先超声，再经微膜过滤。哈哈...【八戒】就是干杂活的命，听得多了也记不清
【唐僧】又一次露出了笑容，落有风趣的说：“经可常念，路勿重走”
汇总：1：西游漫话之一：压力波动查系统，基线不稳相池灯
链接：http://bbs.instrument.com.cn/topic/6229652
2：西游漫话之二：经可常念，路勿重走
链接：http://bbs.instrument.com.cn/topic/6232963
3：西游漫话之三：隐身论坛，潜心学习
链接：http://bbs.instrument.com.cn/topic/6235729

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一片枫叶

第1楼2016/07/16

应助达人

经不要念邪了，路不要走歪了......

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海军哥

第2楼2016/07/16

求问如果保护柱柱芯填料和色谱柱填料不一样会产生怎样的影响呢？

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一片枫叶

第3楼2016/07/16

应助达人

不可避免的会造成：不应该保留的成分保留了，应该保留的成分反而没有保留，起不到保护色谱柱应有的作用。
海军哥(v2738548) 发表:求问如果保护柱柱芯填料和色谱柱填料不一样会产生怎样的影响呢？

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feigekai

第4楼2016/07/16

只要不把目标物质吸附就影响不大，但是对杂质的选择性有影响，不利于发挥保护柱的作用。
海军哥(v2738548)发表:求问如果保护柱柱芯填料和色谱柱填料不一样会产生怎样的影响呢？

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