分不开？分的开----芳环磺酸盐的液相色谱分离方法

看花落

2016/09/14

私聊

液相色谱（LC）

五种芳环磺酸盐的液相色谱分离方法浅谈

1-萘磺酸钠，2-萘磺酸钠，蒽醌1,5-二磺酸钠、蒽醌1,8-二磺酸钾和氨基萘酚-二磺酸钠五种物质均为强极性芳环磺酸盐化合物，在水溶液中完全电离成离子状态。在液相色谱分析中，五种物质的保留性质相似；因其为离子状态，C18反相柱对其没有保留，无法将其成功分离。本分析方法中采用离子对-反相色谱方法对其进行分离。具体分析条件和色谱分离图如下：
表1 色谱分析条件

分析仪器	U3000 HPLC 系统
色谱柱	Diamonsil®(钻石）C18		200*4.6mm，5um
流动相	A	乙腈	梯度洗脱：30min A: 20% ^___45%
	B	0.1%TBA+0.3%磷酸二氢钾
pH	6.5
温度	30℃
流速	1mL/min
检测波长	222nm

图1 五种芳环磺酸盐的液相色谱分离图
1：蒽醌1,5-二磺酸钠，2：氨基萘酚-二磺酸钠，3：蒽醌1,8-二磺酸钾，4：1-萘磺酸钠，5：2-萘磺酸钠

总结：

从色谱条件分析，本方法使用的是常规的反相C18色谱柱，在流动相中加入离子对试剂的方法增强保留性，用磷酸二氢钾调节pH至近中性。方法建立过程中发现pH和乙腈的比例对五种物质的分离影响较大，溶液的pH的大小影响芳环磺酸盐在水溶液中的分子形态，酸性溶液中，各物质形成成分子，中性和碱性条件下电离成离子状态，碱性溶液中有利于与离子对试剂的结合，但考虑到仪器和色谱柱不耐碱性能，选择中性范围较为合适。流动相中乙腈的比例对各物质在色谱柱中的保留时间影响。经过多次试验发现，梯度条件能较理想的将物种五种物质分开，而在等度条件下无法实现，特别是蒽醌1,5-二磺酸钠和氨基萘酚-二磺酸钠，1-萘磺酸那和2-萘磺酸钠两组性能保留性能相似的物质较难分开。
谱分离图来看，三种芳环二磺酸盐和萘磺酸盐完全分开，分离效果较好。蒽醌1,5-二磺酸钠和蒽醌1,8-二磺酸钾因空间结构差异，所表现出来的保留性有明显的区别，因此可以较好的分离。1-萘磺酸钠和2-萘磺酸钠结构性质非常相似，化学性质也相近，较难分离，目前还未建立将两者完全分离的方法。图中所示分离度不如其他物质理想。

分
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夏天的雪

第1楼2016/09/16

应助达人

色谱柱pH耐受范围一般在2~8，有些色谱柱可以耐受2~10,甚至更严厉的酸碱，楼主的流动相pH值为6.5，而且文中提到pH值和乙腈的比例对分离有很大影响，建议楼主可以继续改变pH值或乙腈比例试试

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浪淘沙隐

第2楼2016/09/19

另外，有机相换成甲醇说不定会有惊喜。

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看花落

第3楼2016/09/20

谢谢大家的建议，最近本人有尝试过用甲醇对几种芳环磺酸盐进行新的方法研究，还是以0.1%TBA+0.1%磷酸二氢钾和甲醇在梯度条件下进行. 发现甲醇比乙腈具有更好的分离效果，1-萘磺酸和2-萘磺酸基本完全分开，分离度好且出峰时间合适。以下是分离色谱图，给大家做个参考，欢迎大家提问交流。

1：4-羟基苯磺酸钠， 2：蒽醌1,5-二磺酸钠，3：蒽醌1,8-二磺酸钾，4：1-萘磺酸钠，5：2-萘磺酸钠

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看花落

第4楼2016/09/20

对于乙腈比例已由多次尝试，给的是我达到的最佳分离时乙腈比例，目前有机相换做甲醇得到了更好的分离效果。
夏天的雪(bingwang228) 发表:色谱柱pH耐受范围一般在2~8，有些色谱柱可以耐受2~10,甚至更严厉的酸碱，楼主的流动相pH值为6.5，而且文中提到pH值和乙腈的比例对分离有很大影响，建议楼主可以继续改变pH值或乙腈比例试试

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看花落

第5楼2016/09/20

甲醇相对乙腈有更好的分离度，已给图。
浪淘沙隐(zhoujin83) 发表:另外，有机相换成甲醇说不定会有惊喜。

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夏天的雪

第6楼2016/09/20

应助达人

甲醇分离的不错哦
看花落(v3137073) 发表: 对于乙腈比例已由多次尝试，给的是我达到的最佳分离时乙腈比例，目前有机相换做甲醇得到了更好的分离效果。

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我是风儿

第7楼2016/10/09

应助达人

为什么用甲醇比用乙腈做流动相的分离度会更好呢？

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zyl3367898

第8楼2016/10/09

应助达人

再添些例子会更好。

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看花落

第9楼2016/10/11

个人觉得是由于甲醇和乙腈对芳环化合物的洗脱能力的区别，本质上来看因为乙腈带有孤对电子，和芳环磺酸盐之间的相互作用更强，因而洗脱能力也更强，对于结构性质非常相似的1-萘磺酸和2-萘磺酸来说，在洗脱能力相对较弱的甲醇条件下两者表现出来的保留性质的差异较乙腈明显（相当于差异放大的功能），从而分离度更好。
我是风儿(nphfm2009) 发表:为什么用甲醇比用乙腈做流动相的分离度会更好呢？