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请各位专家给判断一下,是不是水有问题?

液相色谱(LC)

  • 做实验时发现每个谱图的三分多钟都有一个峰,怀疑哪里有问题,于是做了以下几个检测
    色谱条件:预柱:WondaCract ODS-2 5μm,4mm×4.5cm。
    色谱柱:WondaCract ODS-2 5μm,4.6×250mm(8520-39993)
    流动相:A泵甲醇 +B泵纯化水。
    波长:300nm。
    进样量:10μL。
    流速:1.0mL/min。

    这是实验图,出峰时间3.63为怀疑目标峰:
    先进了两空针,流动相5%甲醇,无锋。
    然后进了两针水,流动相5%甲醇:

    又进了两针水,流动相100%甲醇:

    进了两针甲醇,流动相100%甲醇,无锋
    可不可以说是水有问题?
  • 该帖子已被版主-支点加5积分,加2经验;加分理由:问题很详细,有图
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  • sdlzkw007

    第1楼2016/11/08

    应助达人

    怀疑水有问题可以考虑替代一下,市面上的哇哈哈纯净水和屈臣氏蒸馏水都不错的

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  • 浪淘沙隐

    第2楼2016/11/08

    不是水的问题,这是溶剂峰。当你的流动相和溶剂不一样时,溶剂进入到流动相中并经过色谱柱到达检测器,其吸光度是不一样的,就会出现“峰”。一般像甲醇、水之类极性大的物质基本都是在死时间(约3min)出“峰”。

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  • 清无痕

    第3楼2016/11/09

    谢谢,准备买屈臣氏蒸馏水替代一下,看结果出来再汇报

    sdlzkw007(sdlzkw007) 发表:怀疑水有问题可以考虑替代一下,市面上的哇哈哈纯净水和屈臣氏蒸馏水都不错的

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  • 清无痕

    第4楼2016/11/09

    谢谢版主的回复
    进了甲醇无峰,进水有峰,这是什么道理?

    该峰对后面的检测结果有影响,分离度不好,该如何做?如图:

    在这谢谢各位了!

    浪淘沙隐(zhoujin83) 发表:不是水的问题,这是溶剂峰。当你的流动相和溶剂不一样时,溶剂进入到流动相中并经过色谱柱到达检测器,其吸光度是不一样的,就会出现“峰”。一般像甲醇、水之类极性大的物质基本都是在死时间(约3min)出“峰”。

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  • 浪淘沙隐

    第5楼2016/11/09

    你现在不用纠结水的问题了,调下流动相或者色谱柱吧。不清楚你这方法流动相是什么,如果有机相比较多就把有机相比例降下来。如果可以把待测物名字或结构发过来看看。

    清无痕(p3118281) 发表: 谢谢版主的回复
    进了甲醇无峰,进水有峰,这是什么道理?

    该峰对后面的检测结果有影响,分离度不好,该如何做?如图:

    在这谢谢各位了!

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  • 清无痕

    第6楼2016/11/09

    谢谢回复
    流动相10%甲醇,90%水,流速1ml/min,柱温25℃,流动相没有调PH
    4,5-二氢-4,5-二氧化-1-氢吡咯(2,3f)醌-2,7,9一三羧酸。分子式是C14H6N2O8,分子量为330.206,pka值1.88


    浪淘沙隐(zhoujin83) 发表: 你现在不用纠结水的问题了,调下流动相或者色谱柱吧。不清楚你这方法流动相是什么,如果有机相比较多就把有机相比例降下来。如果可以把待测物名字或结构发过来看看。

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  • 辰夕

    第7楼2016/11/09

    那个峰是水峰,这个化合物极性太大了,在你这个柱子上基本没保留了,需要使用离子对试剂增强化合物的保留

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  • 浪淘沙隐

    第8楼2016/11/09

    先试试酸性流动相吧。根据这个化合物的pKa,可以试试醋酸铵(pH4.5)的流动相,并且初始有机相5%开始吧。
    如果还不行,就试试0.1%TFA,但是要注意重复性的问题。
    再不行就换个能用100%水相的柱子,或者离子对等等其他非常规的方法。

    清无痕(p3118281) 发表:谢谢回复
    流动相10%甲醇,90%水,流速1ml/min,柱温25℃,流动相没有调PH
    4,5-二氢-4,5-二氧化-1-氢吡咯(2,3f)醌-2,7,9一三羧酸。分子式是C14H6N2O8,分子量为330.206,pka值1.88


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  • 清无痕

    第9楼2016/11/09

    按你说我会试一试,有了结果再回复,非常感谢!

    辰夕(v3018558) 发表:那个峰是水峰,这个化合物极性太大了,在你这个柱子上基本没保留了,需要使用离子对试剂增强化合物的保留

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  • 清无痕

    第10楼2016/11/09

    有你这样的熟手领路真走运,我也曾经用磷酸缓冲液试过,效果不好,你一下给了几个步骤,这几个步骤给我们新手很大帮助
    非常感谢!安排人去买相关试剂

    浪淘沙隐(zhoujin83) 发表: 先试试酸性流动相吧。根据这个化合物的pKa,可以试试醋酸铵(pH4.5)的流动相,并且初始有机相5%开始吧。
    如果还不行,就试试0.1%TFA,但是要注意重复性的问题。
    再不行就换个能用100%水相的柱子,或者离子对等等其他非常规的方法。

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