深海的海豚
第1楼2006/12/06
在申报资料中经常会看见这种情况:就是研究者直接用灵敏度为0.06或0.03的鲎试剂进行试验,资料中既不交代是否是由于样品有干扰,不能用高于此灵敏度的鲎试剂进行试验,或者是样品没有干扰,实验者手中只有这种灵敏度的鲎试剂,审评人员根本无法根据资料情况判断样品本身是否产生了干扰?其引起干扰的浓度为多少?不产生干扰的样品的浓度又为多少?在此情况下,无法对方法的可行性作出判断。因为现在市售灵敏度最高的鲎试剂也就是0.03,而前面已经介绍了,生产工艺的细微变化都可能引起其干扰的增加,如果一个样品,原来就只能用0.03灵敏度的鲎试剂进行检测,而这时干扰程度又增加了,则进行检测时,方法已不可行,所以,如果采用稀释法,样品浓度要稀释到必须使用灵敏度为0.06甚至0.03的鲎试剂时,只能说方法的粗放度不够,耐用性不好,最好采用其它手段排除干扰,实在暂时不能排除干扰时,可还是采用经典的热原检查法。
在资料中有时也会看到这种情况,实验者先采用一种灵敏度的鲎试剂(如灵敏度为0.5EU/ml)进行预试验,只做了一个样品浓度,就是灵敏度0.5EU/ml所对应的稀释浓度,结果这一浓度有干扰,接着就采用灵敏度为0.06EU/ml的鲎试剂在其相对应的稀释浓度来进行试验,而前面几个浓度样品有没有干扰,资料中根本无从体现,这种方法也是不完善的。
资料中还有一种情况是,实验者在预试验时做到样品稀释到30倍即已不产生干扰,但正式试验时,试验者手中只有 0.125EU/ml灵敏度的鲎试剂,则实验者就把样品稀释到其对应的稀释浓度如120倍进行试验,其实这时正确的做法应该是就用30倍的稀释液进行试验。现在要确定的是什么浓度不产生干扰,对于用什么灵敏度的鲎试剂是没有影响的,干扰试验与鲎试剂灵敏度无关。理论上某一浓度无干扰,则对各种灵敏度的鲎试剂都没有干扰。只不过使用的鲎试剂过于灵敏,如样品本身内毒素偏高,则容易产生阳性,故在进行研究工作时,一般使用较低灵敏度的TAL进行试验,如采用0.5EU/ml或0.25EU/ml灵敏度的鲎试剂,避免由于样品本身所含内毒素所造成的干扰影响。
中国药典2005年版一部也增加了细菌内毒素检查,但中药注射剂进行内毒素检查要慎重。由于中药成分比较复杂,干扰因素也多,其中的成分由于原料及提取工艺不同,干扰因素也在变动,确定剂量时,不要单纯用M值,最好加上安全因子。对于中药注射剂来说,不光是原料、工艺对细菌内毒素检查有影响,其中所含的鞣质、多糖等都有影响,也许用热原检查可能更合适。现在又推出一种新的体外热原试验方法【2】【3】,利用免疫分析方法测定细胞因子(cytokine)以检查药品中污染的热原,这些细胞因子包含白细胞介素-1、肿瘤坏死因子¦Α、白细胞介素-6和干扰素,目前认为它们是进入体内的热原物质刺激外周血中白细胞释放的具有热原和炎症活性的“内源性热原”。这种体外热原试验方法一旦被药典收载,可能会克服中药细菌内毒素检查中出现的一些弊端。
细菌内毒素检查法研究中应注意的几个方面