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关于乳铁蛋白检测的问题

瓜西西

2018/01/19

液相色谱（LC）

最近开发了一个关于乳粉中乳铁蛋白检测的方法，结果发现了两个问题，造成的困扰很大，请各位支招
1、检测发现产品有两个峰（挨的很近），查文献资料乳铁蛋白是有多种构型其中两种含量比较多，其分子量差异不大（84K与80K）。但对照品市场只能购买一种构型对照（还未标识是那种构型），我用这种对照去定量两个峰是否可行？请从方法合规性上分析
2、采用的方法是梯度洗脱，刚好目标峰出在梯度峰一个时间，使用空白和不进样已经确认是梯度峰。尝试改变梯度，目标峰出的很差，所以非常纠结。这个梯度峰存在对方法合规性来说影响大吗？从定量角度来说应该是不影响定量的。

分
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飘殇

第1楼2018/01/19

第二个问题感觉会影响的，还是要优化一下条件分开。

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夏天的雪

第2楼2018/01/22

应助达人

标准品只有一种构型，测定出来是一个峰还是两个峰，判断标准品是单标还是混标，如果是单标，那么去定量两个峰感觉是有问题的，如果是混标，有可能是测定总量，或许可以；问题2中溶剂峰和待测物质同时出峰，肯定会影响定量的，尤其在低浓度的时候

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m3328503

第3楼2018/01/22

我们检测乳粉中的乳清蛋白，乳铁蛋白没有做过

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瓜西西

第4楼2018/02/05

方法已经优化无数次了，搞不定，使用的是肝素的柱子，很短。调整比例要么峰宽很宽，无法定量，要么就是梯度峰和目标峰一起。
检测蛋白质用液相方法就是个坑啊
之前的IGG一样
飘殇(zx08052109) 发表:第二个问题感觉会影响的，还是要优化一下条件分开。

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瓜西西

第5楼2018/02/05

1、对照只有一个峰，但是样品出来两个峰。跟试剂盒方法做对比，两个峰积分结果才一致。但是试剂盒挺贵的
2、溶剂峰和目标峰重叠，我个人觉得没啥影响啊。因为使用曲线校正的，如果对样品有增量贡献，同时也会对对照有增量贡献，这两种贡献应该是相互抵消的。除非样品含量过低，低于定量限。
夏天的雪(bingwang228) 发表:标准品只有一种构型，测定出来是一个峰还是两个峰，判断标准品是单标还是混标，如果是单标，那么去定量两个峰感觉是有问题的，如果是混标，有可能是测定总量，或许可以；问题2中溶剂峰和待测物质同时出峰，肯定会影响定量的，尤其在低浓度的时候

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瓜西西

第6楼2018/02/05

乳铁蛋白是乳清蛋白里面的一小小部分
m3328503(m3328503) 发表:我们检测乳粉中的乳清蛋白，乳铁蛋白没有做过

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夏天的雪

第7楼2018/02/12

应助达人

1、样品两个峰积分结果相加才一致，那么对照品只有一个峰，用该对照品的峰面积定量应该会有区别了。试剂盒是特异性检测，两种构型可能都能检测出来，如果对照品只有一个峰，只有一种物质；
2、溶剂峰和目标峰重叠对定量会有影响，不一定要低于检出限，就如同做标准曲线时空白不能过零点，空白高会出现截距高
瓜西西(v2715441) 发表:1、对照只有一个峰，但是样品出来两个峰。跟试剂盒方法做对比，两个峰积分结果才一致。但是试剂盒挺贵的
2、溶剂峰和目标峰重叠，我个人觉得没啥影响啊。因为使用曲线校正的，如果对样品有增量贡献，同时也会对对照有增量贡献，这两种贡献应该是相互抵消的。除非样品含量过低，低于定量限。

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