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难忘赛场岁月1——畜产品磺胺残留检测比武小记

栀子花开

2018/07/01
分析者端木精英队

前处理综合讨论

难忘赛场岁月1——畜产品磺胺残留检测比武小记

1背景
2016年9月份，浙江省农业厅、浙江省海洋与渔业局、浙江省人力资源和社会保障厅、浙江省总工会、共青团浙江省委员会共同发文，定于10月19日至21日举办第五届全省农产品质量安全检测技能竞赛暨第三届全国检测技能竞赛浙江省预赛。要求各市种植业产品、畜禽产品、水产品各派出1名选手参加比武，竞赛采用理论知识考试和现场操作考核相结合的形式举行，理论知识主要考核农产品质量安全法律法规、检验检测基础知识、检测机构管理规范和实验室操作技能知识等内容；现场操作主要考核种植业产品蔬菜水果农药残留、畜禽产品兽药残留及违禁物质和水产品兽药残留及违禁物质的定量检测。
2准备工作
作为畜产品监测队伍的一员，毫无意外地被选拔为畜禽产品选手参加省里的比武。比武前几天确定下来，现场操作的项目是《动物源性食品中磺胺类药物残留的检测方法—高效液相色谱法》（农牧发38号）。说实在的，虽然从事兽药残留检测8年，但平时做的都是瘦肉精ELISA检测，定量检测只是在省里培训时做过几次，对具体操作细节的掌握还没多大把握。
既然要比武，就要做好准备工作。先找来《动物源性食品中磺胺类药物残留的检测方法—高效液相色谱法》（农牧发38号）文件仔细研读，对每一步操作需要掌握的细节进行研判。对存在疑惑的细节上网查找相关资料，实在不确定的向省级检测机构的老师请教，终于在赛前基本摸清了操作要点。
3熟悉场地
10月19日下午，比赛举办单位带领全体选手熟悉场地和所用设备。操作比赛放在浙江省饲料兽药监察所进行，该所于2014年7月从市区搬迁至新建的浙江牧业监测大楼。熟悉场地主要是了解比赛当天的等候区、比赛区位置，熟悉设备主要是对比赛所用的设备进行试操作，以免比赛时因不熟悉仪器设备的性能而影响实验结果。
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前面啰啰嗦嗦介绍了比武的一些背景资料，下面介绍比武操作的细节与得失。
4操作比赛
为避免个别选手误操作影响其他选手的最终结果，比赛采用选手负责前处理（提取和净化）、饲料所专业人员负责上机（检测）的方式。
4.1赛前检查
赛前每个选手进行编号，随机抽签确定比赛顺序。受场地和仪器设备所限，分三批进行，未轮到的选手统一在等候区休息。
进入比赛区后，先给10分钟时间检查准备的器材是否齐全或存在缺陷。器材由饲料所各位老师精心准备，一般不会出错，但还是需要检查一下。
4.2提取
4.2.1要求：准确称取5.0g组织样品匀浆物，置于50mL聚丙烯离心管中，做2个平行样。
操作：（1）取4支塑料离心管并编号，一般编为1-4号，其中1号、2号放样品；（2）检查电子天平是否处于水平位置，若否则进行调整；（3）放置一个小烧杯于电子天平称盘上，放入塑料离心管，去皮；（4）用药匙刮取约5g猪肉，置于塑料离心管底部，称量、调整并记录；（5）报告裁判称量结束，等待裁判加标。
要点：塑料离心管需在管盖和管身上同时编号，以防管盖和管身混用；电子天平一定要检测是否处于水平位置，若是则向裁判示意，若否应进行调整，调整完毕向裁判示意；样品一定要置于离心管底部，若未处于底部可用药匙推至底部；称量后若超过所需量可用药匙刮出一部分，若不足可再加量，一般应控制在4.9g~5.1g之间；称量结束后需立即在记录纸上记录样品量，并报告裁判等待加标。
4.2.2要求：加无水硫酸钠4g和乙腈25mL，涡动混合15秒，中速振荡20min，2500rpm离心5min。
操作：（1）量取乙腈25mL，备用；（2）称取无水硫酸钠4g，加入1支离心管中，迅速加入乙腈25mL并进行涡动混合；（3）待2个平行样均混合后，一起置于振荡器中振荡；（4）振荡结束后取出，放置一个小烧杯于电子天平称盘上，放入1号塑料离心管进行称重，取出后放入3号空离心管，加水至与1号离心管等重；依次操作2号与4号离心管；（5）放入离心机离心。
要点：一定要先准备好乙腈，否则加入无水硫酸钠后再量取乙腈，容易造成无水硫酸钠结块而无法混匀；放入振荡器前一定要旋紧离心管盖；离心前的平衡不能采用向平行样中加入试剂或水的方式操作；放入离心机时要注意离心管一一对应。
4.2.3要求：上清液移至分液漏斗中，加入30mL正己烷，振摇2min后，静止5min，分离乙腈层。
操作：（1）取分液漏斗编号；（2）小心将离心管中的上清液倒入分液漏斗中；（3）用量筒量取30mL正己烷加入分液漏斗；（4）振摇2min静置5min后分离乙腈层。
要点：分液漏斗要编号以防混用；正己烷味道很重，宜量取后迅速加入；振摇时需不时放气。
4.2.4要求：用25mL乙腈将沉淀物重复提取1次，乙腈层经同一份正己烷分配。
操作：（1）用原量筒量取25mL乙腈加入沉淀物中，涡动混合、振荡、离心；（2）上清液加入含正己烷的分液漏斗中；（3）振摇、静置、分离乙腈层。
要点：量取乙腈一定要用原量筒（量筒等数量均有数量限制）；其他要点同上。
4.2.5要求：合并乙腈层于100ml鸡心瓶中，加入正丙醇5mL，50℃减压浓缩至近干。
操作：（1）将两次分离的乙腈倒入鸡心瓶中；（2）用吸管吸取正丙醇5mL，加入鸡心瓶中；（3）在旋转蒸发仪上进行减压浓缩。
要点：此步操作是整个提取过程的关键和难点。旋转蒸发仪的水浴锅一定要提前加热至所需温度；鸡心瓶不能直接浸入水浴锅中以免暴沸；一定要先打开真空泵并设置较小负压，然后逐步加大负压至稳定状态，才能将鸡心瓶浸入水浴锅中；在浓缩过程中要随时关注液体状态，有暴沸苗头时要及时提升鸡心瓶降低温度。总之，这一步的关键是防止暴沸，一旦暴沸实验基本以失败告终。
4.2.6要求：用3mL乙腈-水（95＋5,v/v）溶解残留物。
操作：（1）用吸管吸取3mL乙腈-水，加入鸡心瓶中，溶解残留物。
要点：要将乙腈-水混合物洗遍鸡心瓶内壁，防止有遗漏之处，造成回收率偏低。
4.3净化
4.3.1要求：将上述样品液通过碱性氧化铝SPE柱，不收集，用乙腈-水（95＋5,v/v）5mL洗涤鸡心瓶，并过SPE柱，吹去柱内滞留的液体。
操作：（1）在固相萃取装置上安装SPE柱，加入样品液，不收集；（2）用吸管吸取5mL乙腈-水，加入鸡心瓶中进行再次洗涤，并过SPE柱；（3）吹干SPE柱。
要点：样品液过SPE柱时要注意控制速度，太快影响净化效率，太慢则耗时太长可能在规定时间内无法完成实验。
4.3.2要求：用5mL乙腈-水（75＋25,v/v）洗脱待测物至10mL容量瓶中，用0.017mol/L 磷酸定容至10mL，过0.45μm微孔滤膜后收集滤液，供HPLC测定。
操作：（1）在固相萃取装置中放入10mL容量瓶以接取洗脱液；（2）用一支新的吸管吸取5mL乙腈-水（75＋25,v/v）加入SPE柱进行洗脱；（3）取出容量瓶，用0.017 mol/L 磷酸定容至10mL；（4）吸取洗脱液过0.45μm微孔滤膜，滤液收集在样品瓶中备用。
要点：容量瓶要进行编号，与样品编号一一对应；洗脱速度要注意控制，不能太快、太慢；定容至接近10mL时要换用胶头滴管逐滴加入；微孔滤膜过滤时，前面0.5mL滤液应弃去；滤液应收集足够量，不能太少；样品瓶应编号，与样品编号一一对应。
上述操作及要点是根据本人的理解梳理得来，根据上述操作及注意事项，在本次畜产品磺胺残留检测比武实际操作中，本人获得第3名的成绩，得到省农业厅等部门的表彰。比武的评分标准是保密的，即使时隔数年，向相关老师索取也不予提供。但从本人的操作成绩来看，这些理解大部分还是有其合理性的，其中的不妥之处，欢迎各位老师批评指正。

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夏天的雪

第1楼2018/07/01

应助达人

能上战场的都是高手

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端木

第2楼2018/07/02

必须是高手，都是给单位争光的
夏天的雪(bingwang228) 发表:能上战场的都是高手

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Better521

第3楼2018/07/02

磺胺水浴50℃减压浓缩是最不好控制的，我曾遇到过抽真空时突然爆沸毫无征兆。所以这有时候经验和预判就显得尤为重要。

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栀子花开

第4楼2018/07/02

应助达人

确实如此，而且一旦暴沸基本上宣告实验失败
Better521(v3170011)发表:磺胺水浴50℃减压浓缩是最不好控制的，我曾遇到过抽真空时突然爆沸毫无征兆。所以这有时候经验和预判就显得尤为重要。

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社区=冬季=

第5楼2018/07/02

多少人参赛？
你估计是在哪里失分？
是操作过程还是最后的数据处理？

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栀子花开

第6楼2018/07/03

应助达人

11人参赛。
失分情况很难分析，因为评分标准不公布，而且操作出现失误时裁判也不会给予提示。
社区=冬季=(lylsg555)发表:多少人参赛？
你估计是在哪里失分？
是操作过程还是最后的数据处理？

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沧海青城

第7楼2018/07/03

应助达人

很好的经验分享，赞一个

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夏天的雪

第8楼2018/07/03

应助达人

参加比赛不仅要技术高强，还是有很好的实验习惯，需要表里如一

0

Shy WONG

第9楼2018/07/03

应助达人

LZV5！讲解的挺详细的，受教了！

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Insm_dfb7f681

第10楼2018/07/03

磺胺类一下分析15种出来，有时候分不出来，有比较好的比例没

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