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—凯氏定氮仪的校准

凯氏定氮仪是根据蛋白质中氮的含量恒定的原理，通过测定样品中氮的含量从而计算蛋白质含量的仪器。因其蛋白质含量测量计算的方法叫做凯氏定氮法，故被称为凯氏定氮仪，又名定氮仪、蛋白质测定仪、粗蛋白测定仪。

将样品与硫酸共热使其中的氮转化为硫酸铵。在这一步中，经常会向混合物中加入硫酸钾和硫酸铜来提高中间产物的沸点。样本的分析过程的终点很好判断，因为这时混合物会变得蓝色且透明（开始时很暗）在得到的溶液中加入少量氢氧化钠，然后蒸馏。这一步会将铵盐转化成氨。而总氨量（由样本的含氮量直接决定）会由反滴定法确定：冷凝管的末端会浸在硼酸溶液中。氨会和酸反应，而过量的硼酸则会在指示下用盐酸标准溶液滴定。滴定所得的结果乘以特定的转换因子就可以得到结果。

从凯氏定氮原理可以知道：凯氏定氮法是将含氮有机物转变为无机氮硫酸铵来进行检测，以得到含氮量的测定值乘以一定系数得出蛋白质含量。而含氮有机物不仅仅是蛋白质，还有三聚氰胺等等。在加上食品中蛋白质含量的现行国家标准和国际通行测定方法是经典凯氏定氮法，这就为造假者提供了可乘之机。蛋白质中的含氮量不超过30%，三聚氰胺的最大的特点是含氮量很高（66%），溶于水后无色无味，也就是说在一杯清水中加入三聚氰胺，然后用凯氏定氮法检测，结果显示是含有蛋白质的。由于“凯氏定氮法”只能测出含氮量,并不能鉴定饲料中有无违规化学物质,所以,添加三聚氰胺的奶粉理论上可以测出较高的蛋白质含量。

仪器厂家通常使用硫酸铵溶液来作为氮含量测试的校准溶液，下面就来整理一下实际操作中存在的问题。

首先是硫酸铵试剂选用的等级和校正因子的使用。准确称取分析纯(99.5%)硫酸铵0.47417克，用符合GB/T6682标准规定的一级水定容至100毫升A级容量瓶中，此溶液含氮量计算如下：0.47417*99.5%*14.0037*2/132.14=0.1000g/100ml

使用A级胖肚移液管准确移取5.00ml上述溶液至凯氏定氮仪的蒸馏管中，按照仪器设定的程序测定含氮量，结果(mg)如下

滴定用的标准盐酸溶液使用基准碳酸钠标定得到浓度:0.1025mol/L,滴定体积单位：ml

使用A级胖肚移液管准确移取10.00ml上述溶液至凯氏定氮仪的蒸馏管中，按照仪器设定的程序测定含氮量，结果(mg)如下

改用天平直接称取分析纯(99.5%)硫酸铵约0.236克（精确至0.0001克）至凯氏定氮仪的蒸馏管中，按照仪器设定的程序测定含氮量，结果(mg)如下

采用溶液法校准凯氏定氮仪方便快捷，但是考虑到容量瓶和移液管的不确定度，综合分析下来不如天平直接称量法，而且溶液的浓度不宜配制的过高，移取的溶液体积也有一定的局限性，因为在整个测定过程中水蒸气蒸馏会导致蒸馏管中液体溢出。另外使用质量控制样品的测试结果还要受到消解转化率的影响，这里不再赘述。